[发明专利]一种通过灰度值计算微生物单元数浓度的方法

说明书

一种通过灰度值计算微生物单元数浓度的方法，包括：根据待测样品中待测微生物的核酸的目的基因PCR扩增产物的灰度值，以及不同浓度的质粒标准品的起始拷贝数浓度与各个质粒标准品的PCR扩增产物灰度值的函数关系，计算得到待测样品中待测微生物的单元数浓度，各个质粒标准品中含有对应微生物的目的基因。通过扩增产物的灰度值计算待测样品中的rRNA基因的拷贝数，进而计算得到待测样品中的待测微生物单元数，不用培养细胞，显著减少实验材料，缩短操作时间。通过PCR扩增产物的灰度值计算待测样品中的待测微生物目的基因的拷贝数浓度，进而计算得到待测样品中的待测微生物单元数浓度，不用培养细胞，显著减少实验材料，缩短操作时间。

技术领域

本发明涉及细胞计数领域，具体涉及一种通过灰度值计算微生物单元数浓度的方法。

背景技术

现有的细胞计数方法主要包括血球计数板计数法、图像法、各类手工计数等，这些方法都需要先对细胞进行培养，测定过程要求细胞悬浊液均匀，其过程比较漫长。血球计数板在显微镜下能直接读出每个小方格中的微生物的个体数目，根据该小格所占的体积，快速地推算出单位体积的溶液中含有的微生物总数。但需要准备的材料较多，若菌悬液中不加可以区分细胞死活的试剂时，计数通常计得的是活菌体和死菌体的总和，还有微小杂物也被计算在内，这样得出结果往往偏高，因此，该方法仅仅适用于体积较大的单细胞微生物的计数。细胞直接计数法虽然操作简单，但是耗费时间长，所需细胞量多。虽然市场上有各种类型的细胞计数仪，可以省去人工计数，但同样需要人工培养细胞，且有的仪器操作复杂。因此，目前用于细胞计数的方法不仅耗时费力，且会存在技术和仪器的误差。

发明内容

根据第一方面，一种实施例中提供一种通过灰度值计算微生物单元数浓度的方法，包括：根据待测样品中待测微生物的核酸的目的基因PCR扩增产物的灰度值，以及不同浓度的质粒标准品的起始拷贝数浓度与各个质粒标准品的PCR扩增产物灰度值的函数关系，计算得到待测样品中待测微生物的单元数浓度，各个质粒标准品中含有对应微生物的目的基因。

依据上述实施例的通过灰度值计算微生物单元数浓度的方法，通过PCR扩增产物的灰度值计算待测样品中的待测微生物目的基因的拷贝数浓度，进而计算得到待测样品中的待测微生物单元数浓度，不用培养细胞，显著减少实验材料，缩短操作时间。

附图说明

图1为一实施例的E.coil的PCR产物拍照成像图；

图2为一实施例的E.coil灰度值公式曲线图；

图3为一实施例的的B.fragilis的PCR产物拍照成像图；

图4为一实施例的B.fragilis灰度值公式曲线图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。其中不同实施方式中类似元件采用了相关联的类似的元件标号。在以下的实施方式中，很多细节描述是为了使得本申请能被更好的理解。然而，本领域技术人员可以毫不费力的认识到，其中部分特征在不同情况下是可以省略的，或者可以由其他元件、材料、方法所替代。在某些情况下，本申请相关的一些操作并没有在说明书中显示或者描述，这是为了避免本申请的核心部分被过多的描述所淹没，而对于本领域技术人员而言，详细描述这些相关操作并不是必要的，他们根据说明书中的描述以及本领域的一般技术知识即可完整了解相关操作。

另外，说明书中所描述的特点、操作或者特征可以以任意适当的方式结合形成各种实施方式。同时，方法描述中的各步骤或者动作也可以按照本领域技术人员所能显而易见的方式进行顺序调换或调整。因此，说明书和附图中的各种顺序只是为了清楚描述某一个实施例，并不意味着是必须的顺序，除非另有说明其中某个顺序是必须遵循的。

本文中为部件所编序号本身，例如“第一”、“第二”等，仅用于区分所描述的对象，不具有任何顺序或技术含义。而本申请所说“连接”、“联接”，如无特别说明，均包括直接和间接连接(联接)。