[发明专利]大豆皱叶症抗性鉴定的KASP分子标记及应用

权利要求书

1.大豆皱叶症抗性鉴定的KASP分子标记引物，其特征在于，所述KASP分子标记引物序列如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

2.大豆皱叶症抗性的基因分型方法，其特征在于，提取大豆基因组DNA，用SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的KASP标记引物对提取的基因组DNA进行PCR扩增。

3.根据权利要求2所述的大豆皱叶症抗性的基因分型方法，其特征在于，所述PCR扩增方法为：

PCR反应体系：DNA 2.5µL、KASP引物混合物 0.07μL、2×KASP Master mix 2.5μL；

PCR反应程序：94℃预变性15 min；94℃变性20 s，61-55℃梯度PCR ，每循环降低0.6℃，共10个循环；94℃变性20 s，55℃复性及扩增60 s，共26个循环；

所述的KASP引物混合物包括FAM上游引物、HEX上游引物、通用下游引物和纯水。

4.根据权利要求3所述的大豆皱叶症抗性的基因分型方法，其特征在于，所述KASP引物混合物由浓度均为100µM的FAM上游引物、HEX上游引物、通用下游引物与纯水按6:6:15:23体积比混合而成。

5.如权利要求1所述的大豆皱叶症抗性鉴定的KASP分子标记引物在大豆皱叶症抗性鉴定中的应用。

6.根据权利要求5所述的KASP分子标记在大豆皱叶症抗性鉴定中的应用，其特征在于，所述鉴定方法如下：

(1)获得待测样品基因组DNA；

(2)以基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的KASP分子标记引物进行竞争性等位基因特异性PCR反应扩增；

(3)PCR反应结束后，收集每个反应孔产生的荧光信号，根据荧光信号的类型判断分子标记的基因型，进而鉴定出待鉴定个体的皱叶症抗性。

7.一种大豆皱叶症抗性检测试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的大豆皱叶症抗性鉴定的KASP分子标记引物。