[发明专利]一种铜离子诱导重组蛋白表达体系及其诱导方法和应用

权利要求书

1.一种表达载体，其特征在于，所述的表达载体中包括加入优化的MCS序列的copA启动子序列，所述加入优化的MCS序列的copA启动子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种包含权利要求1所述的表达载体的宿主大肠杆菌，其特征在于，所述的宿主大肠杆菌中copA和cueO基因被双敲除。

3.一种铜离子诱导的重组蛋白表达体系，其特征在于，所述的表达体系包括权利要求1所述的宿主大肠杆菌和权利要求2所述的表达载体。

4.一种铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，所述方法步骤包括：

1)将目的蛋白的编码序列克隆到权利要求1所述的表达载体中；

2)得到的表达载体转化入权利要求2所述的宿主大肠杆菌中过夜生长；

3)过夜生长的菌株加入培养基中培养至对数生长期；

4)再向菌株培养基中添加含铜离子液体进行诱导。

5.根据权利要求4所述的铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤3)中，所述的菌株培养基为新鲜的LB培养基或2×LB培养基。

6.根据权利要求4所述的铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤3)中过夜生长的菌株加入培养基中时，使起始菌夜OD₆₀₀值为0.02。

7.根据权利要求4所述的铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤4)中所述的含铜离子液体的浓度为2-2000μmol/L。

8.根据权利要求4所述的铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤4)中所述的含铜离子液体为含铜工业废水。

9.根据权利要求4所述的铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，步骤4)中所述的诱导条件为16℃诱导24h。

10.根据权利要求4-9任一项所述的铜离子诱导重组蛋白表达的方法，其特征在于，所述的目的蛋白为Pfu蛋白或CueO蛋白。