[发明专利]一种同时检测百香果三种病毒的引物组、试剂盒及方法有效
| 申请号： | 202110194263.0 | 申请日： | 2021-02-20 |
| 公开（公告）号： | CN113025750B | 公开（公告）日： | 2023-08-25 |
| 发明（设计）人： | 吴自林;莫翠萍;李伟豪;高小宁;陈兴龙;张南南 | 申请（专利权）人： | 广东省科学院生物工程研究所;华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 广州科粤专利商标代理有限公司 44001 | 代理人： | 朱双;刘明星 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 同时 检测 百香果三种 病毒 引物 试剂盒 方法 | ||
1.一种同时检测百香果三种病毒的引物组，其特征在于，包括以下3对引物：
扩增TeMV的特异性引物：
TeMV-F：5’-AGTTGGGAGGACACAAGCCAG-3’，
TeMV-R：5’-CAACCTCACTGTGTTCAAGAC-3’；
扩增EAPV的特异性引物：
EAPV-F：5’-ACAAAGAGAAAGAAGCCGACA-3’，
EAPV-R：5’-GGACTTTATCAAGCGCACCT-3’；
扩增TMV的特异性引物：
TMV-F：5’-GATTCGGAGACTACTGTCGCC-3’，
TMV-R：5’-CCACGTGTGATTACGGACAC-3’。
2.一种同时检测百香果三种病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的同时检测百香果三种病毒的引物组。
3.根据权利要求2所述的同时检测百香果三种病毒的RT-PCR试剂盒，其特征在于，每个反应体系包括：2×1step buffer 10.0μl，权利要求1所述的引物TeMV-F和TeMV-R的终浓度0.25μmol/L、权利要求1所述的引物EAPV-F和EAPV-R的终浓度0.25μmol/L、权利要求1所述的引物TMV-F和TMV-R的终浓度0.5μmol/L，5U/μL的PrimeScript 1step Enzyme Mix2.5U，RNA模板1.0μL，体系共20μL，余量为水。
4.一种同时检测百香果三种病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.提取待检测百香果样品总RNA；
b.以步骤a提取的总RNA为模板，以权利要求1所述的同时检测百香果三种病毒的引物组为引物，一步法RT-PCR扩增，得到PCR产物；
c.将PCR产物进行电泳检测，根据电泳条带大小判断待检测样品中含有病毒的情况。
5.根据权利要求4所述的同时检测百香果三种病毒的方法，其特征在于，所述的步骤b的一步法RT-PCR扩增，每个反应体系包括：2×1step buffer 10.0μl，权利要求1所述的引物TeMV-F和TeMV-R的终浓度0.25μmol/L、权利要求1所述的引物EAPV-F和EAPV-R的终浓度0.25μmol/L、权利要求1所述的引物TMV-F和TMV-R的终浓度0.5μmol/L，5U/μL的PrimeScript1step Enzyme Mix 2.5U，RNA模板1.0μL，体系共20μL，余量为水。
6.根据权利要求4所述的同时检测百香果三种病毒的方法，其特征在于，所述的步骤b的一步法RT-PCR扩增，其反应程序为：50℃反转录30min，94℃预变性2min；然后94℃30s，56℃30s，72℃1min，共35个循环；最后在72℃延伸10min，降温至10℃结束反应。
7.根据权利要求4所述的同时检测百香果三种病毒的方法，其特征在于，所述的步骤c中，判断待检测样品中含有病毒的情况的具体依据是：如扩增到836bp大小条带，判断样品中含有夜来香花叶病毒；如扩增到201bp大小条带，判断样品中含有东亚百香果病毒；如扩增到572bp大小条带，判断样品中含有烟草花叶病毒。
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