[发明专利]一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1以及试剂R2，其中试剂R1包括缓冲液50‑200mM，表面活性剂I 0.1‑0.5％，表面活性剂II 0.1‑0.5％，防腐剂0.1‑0.5％，无机盐0.1‑0.8％以及促凝剂1‑2％；试剂R2包括缓冲液50‑100mM，蛋白保护剂1‑5％，防腐剂0.1‑0.5％，无机盐0.1‑0.8％以及包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒。本发明通过在胶乳微球的标记过程中添加苯甲酸以及吗啉组合物，增加了胶乳微球与抗体的标记效率，显著提升试剂在检测高值阳性样本时的抗HOOK能力，使试剂的线性范围达到2‑500mg/L。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒及其制备方法。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A protein，SAA)是一种由肝细胞产生后被分泌到血清中的一种急性时相反应蛋白，属于载脂蛋白家族中的异质类蛋白质，与血浆高密度脂蛋白(HDL)结合。炎症或感染急性期患者体内SAA含量在48-72小时内急速升高，并且在疾病的恢复期迅速下降，作为新的炎症或感染急性期检测指标，SAA在临床应用中发挥着重要作用。

正常人体中，SAA的含量在10mg/L以下，在发生轻微感染时，人体内SAA的含量上升并处于10-200mg/L范围内。但是对于部分疾病患者而言，其体内SAA含量将显著上升，例如重症的手足口患儿体内SAA含量高达600mg/L，患者体内超高的SAA含量能够有效的反应疾病的严重性，同时更加有利于医生进行疾病的判别。

目前，SAA的检测方法包括酶联免疫法以及胶乳增强免疫比浊法等，酶联免疫由于其过程繁琐，检测耗时长，不利于高通量的检测。胶乳增强免疫比浊法具有检测速度快，准确度高的优点，在做到高通量检测的同时保证了检测的准确性，已逐步发展为重要的临床检测手段，但是目前市面上的SAA胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒具有检测线性窄(多数试剂线性范围为200mg/L以下)、抗HOOK能力弱等缺点，不利于疾病的诊断以及不同医学水平的判定。

发明内容

根据上述需求，发明人意外发现，通过在SAA检测试剂盒的胶乳微球标记过程中添加苯甲酸以及吗啉组合物，可以显著增加SAA抗体与胶乳微球的标记效率，同时通过调整试剂配置，显著提升了试剂的检测线性范围以及抗HOOK能力。

本发明提供一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A(SAA)的试剂盒，采用如下技术手段：一种定量检测人体血清淀粉样蛋白A的试剂盒，其特征在于，包括试剂R1以及试剂R2；

所述试剂R1包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-200mM，表面活性剂I 0.1-0.5％，表面活性剂II 0.1-0.5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及促凝剂1-2％；

所述试剂R2包括的成分及相应的含量为：缓冲液50-100mM，蛋白保护剂1-5％，防腐剂0.1-0.5％，无机盐0.1-0.8％以及包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒；

所述包被有SAA单克隆抗体的胶乳颗粒的制备过程包括：在组分A以及组分B的存在下，SAA单克隆抗体与胶乳颗粒偶联，所述组分A选自吗啉或哌啶中的至少一种，优选为吗啉，所述组分B选自苯甲酸或水杨酸中的至少一种，优选为苯甲酸。

优选地，在所述试剂R1中：

所述缓冲液选自Tris、MOPS或磷酸盐缓冲液中的至少一种，优选为MOPS缓冲液；所述表面活性剂I选自Triton X-100或Tween-20中的至少一种，优选为Tween-20；所述表面活性剂II选自Brij 58、Tween-80或A90中的至少一种，优选为A90；所述防腐剂选自Proclin-300、叠氮钠或庆大霉素中的至少一种；所述无机盐选自氯化钠或氯化钾中的至少一种；所述促凝剂选自PEG6000或PEG8000中的至少一种。

优选地，所述试剂R1的pH为6-8，优选为6-6.5。