[发明专利]虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法

权利要求书

1.虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，包括：

取待测样品，加水混匀，加入甲醇，混匀，加入二氯甲烷，混匀，静置，离心，取下层有机相，用丙酮稀释有机相至在474nm下的吸光度值为0.2～0.8；

将经过丙酮稀释的有机相用胆固醇酯酶酶解，得到酶解液，将酶解液用石油醚萃取，收集石油醚层，并用氮气吹干，并用正己烷和丙酮混合液复溶，得到待测样品试样溶液；

用高效液相色谱法检测预先配制的虾青素标准溶液，确定标准曲线，然后用高效液相色谱法检测待测样品试样溶液，根据色谱峰面积和标准曲线确定虾青素的含量。

2.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，每克待测样品需要的甲醇和二氯甲烷分别为2～20mL和5～35mL。

3.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，静置时间至少5min。

4.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，将经过丙酮稀释的有机相用胆固醇酯酶酶解的方法包括：

向经过丙酮稀释的有机相中加入Tris-HCl缓冲溶液，加入胆固醇酯酶溶液，摇匀，在35～40℃水浴下保温处理，得到酶解液。

5.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，将酶解液用石油醚萃取的方法包括：

向酶解液中加入无水硫酸钠和石油醚，混匀，离心，取上清液，向上清液中再次加入石油醚，震摇，收集石油醚层。

6.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，用正己烷和丙酮的体积比为(75～90):(10～25)的混合液复溶，并过孔径不大于0.45μm的滤膜。

7.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，高效液相色谱法的条件包括：检测波长474nm；250mm×4.6mm，5μm C₃₀色谱柱；柱温20-25℃；流动相包括甲醇、叔丁基甲基醚、1％磷酸水溶液，流速1.0mL/min；梯度洗脱。

8.如权利要求7所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，流动相梯度洗脱程序如下：

9.如权利要求1所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，用高效液相色谱法检测预先配制的全反式虾青素标准溶液，确定标准曲线；用高效液相色谱法确定全反式虾青素、13-cis虾青素和9-cis虾青素的保留时间，根据保留时间确定待测样品试样溶液中全反式虾青素、13-cis虾青素和9-cis虾青素对应的色谱峰，根据各色谱峰面积和标准曲线确定虾青素的含量。

10.如权利要求9所述的虾青素水乳剂及其化妆品中虾青素含量的检测方法，其特征在于，标准曲线的拟合方程式为y＝252.99x-0.8944，y为峰面积，x为全反式虾青素的浓度；根据以下公式计算虾青素含量；

X为样品中虾青素的含量、1.3为13-顺虾青素对全反式虾青素的校正因子、A13-cis为试样溶液中13-顺虾青素的峰面积、Atrans为试样溶液中全反式虾青素的峰面积、1.1为9-顺虾青素对全反式虾青素的校正因子、A9-cis为试样溶液中9-顺虾青素的峰面积、V为试样溶液体积、m为水乳剂称取的质量、f为稀释倍数。