[发明专利]一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物、检测试剂盒和应用

权利要求书

1.一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物，其特征在于，包括上游引物和下游引物；

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.一种基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的引物组，其特征在于，包括权利要求1所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物和单碱基延伸引物；

所述单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

3.权利要求1所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物或权利要求2所述引物组在辅助选择多发性骨髓瘤患者化疗用药中的应用。

4.权利要求1所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物或权利要求2所述引物组在检测指导泼尼松用药的基因位点多态性中的应用。

5.一种基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物或权利要求2所述引物组。

6.根据权利要求5所述基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的试剂盒，其特征在于，还包括1×HotStarTaqbuffer、Mg²⁺、dNTP、HotStarTaqpolymerase和SNaPshot Multiplex Kit。

7.权利要求5或6所述基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的试剂盒在检测指导泼尼松用药的基因位点多态性中的应用。

8.权利要求5或6所述基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的试剂盒在辅助选择多发性骨髓瘤患者化疗用药中的应用。

9.一种检测CTLA4基因SNP位点基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提取待检测样本的基因组DNA；

2)以步骤1)中提取的基因组DNA为模板，用权利要求1所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

3)将所述PCR扩增产物在权利要求2所述引物组中单碱基延伸引物的作用下进行单碱基延伸反应，得到延伸产物；

4)将所述延伸产物进行测序，得到待测样本的CTLA4基因SNP基因型。

10.根据权利要求9所述检测CTLA4基因SNP位点基因型的方法，其特征在于，步骤2)中所述PCR扩增的反应程序为95℃，5min；94℃20s，60℃，30s，75℃，1.5min，31循环；72℃，2min；

步骤2)中所述PCR扩增的反应体系为10μl，包括1×HotStarTaqbuffer1μl、25mM Mg²⁺0.6μl、10mM dNTP 0.2μl、1U HotStarTaqpolymerase 0.15μl、1μl样本DNA和1μM上游引物0.5μl和1μM下游引物0.5μl，ddH₂O补充至10μl。

步骤3)中所述单碱基延伸反应的反应体系为10μl，包括5μl SNaPshot MultiplexKit、2μl PCR扩增产物、1μl浓度为1μM延伸引物和2μl超纯水；

步骤3)中所述单碱基延伸反应的反应程序：96℃，1min；96℃10s，55°5s，60℃30s，28个循环。