[发明专利]一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物、检测试剂盒和应用

说明书

本发明提供了一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物、检测试剂盒和应用，属于基因分型检测技术领域。一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物，包括如SEQ ID NO:1所示的上游引物和如SEQ ID NO:2所示的下游引物。本发明还提供了检测CTLA4基因SNP位点基因型的引物组包括所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物和单碱基延伸引物。所述引物组基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因的rs4553808位点，能够准确得到不同样本CTLA4基因的SNP基因型，因此所述引物组在检测指导泼尼松用药的基因位点多态性中的应用，同时为辅助选择多发性骨髓瘤患者化疗用药研究奠定基础。

技术领域

本发明属于基因分型检测技术领域，具体涉及一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物、检测试剂盒和应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(Mulitiple myeloma,MM)是血液系统第二大恶性肿瘤，通常表现为骨髓中浆细胞过度增生，肿瘤细胞产生大量单克隆免疫球蛋白并出现于患者血和(或)尿中，称为M蛋白，引起骨痛、病理性骨折、造血异常、单克隆球蛋白血症及肾功能受损等一系列临床变化。目前，MM仍不可治愈，依靠药物治疗仅提高患者5～7年的生存时间，联合硼替佐米、美法仑和泼尼松(称MP方案)是临床治疗的常见化疗方案。

SNaPshot基因分型技术是由美国ABI公司开发的一种基于荧光标记单碱基延伸链终止反应原理的分型技术，具有检测速度快、检测准确、灵敏度高的特点，使用0.5ng DNA即可进行检测。其原理是在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临SNP位点5’-端的不同长度延伸引物和模板DNA的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经测序仪检测后，根据峰的位置确定该延伸产物对应的SNP位点，而根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。

然而，目前还未有关于采用SNaPshot基因分型技术对临床辅助检测多发性骨髓瘤患者的基因型的报道。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物、检测试剂盒和应用，基于SNaPshot基因分型技术对能够影响多发性骨髓瘤患者在接受MP方案治疗后的副作用的CTLA4基因的rs4553808位点多态性进行检测，确定多发性骨髓瘤患者的基因型，为后续选择用药提供基础。

本发明提供了一种扩增CTLA4基因SNP位点用引物，包括上游引物和下游引物；

所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明提供了一种基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的引物组，包括所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物和单碱基延伸引物；

所述单碱基延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

本发明提供了所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物或所述引物组在辅助选择多发性骨髓瘤患者化疗用药中的应用。

本发明提供了所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物或所述引物组在检测指导泼尼松用药的基因位点多态性中的应用。

本发明提供了一种基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的试剂盒，包括所述扩增CTLA4基因SNP位点用引物或所述引物组。

本发明提供了所述基于SNaPshot SNP分型技术检测CTLA4基因SNP位点基因型的试剂盒，还包括1×HotStarTaq buffer、Mg²⁺、dNTP、HotStarTaq polymerase和SNaPshotMultiplex Kit。