[发明专利]一种土壤DNA快速提取方法及试剂盒

权利要求书

1.一种土壤DNA高效提取试剂盒，其特征在于：由以下七种溶液组成：

(1) Pre-Wash溶液：为KCl和硫酸铵的混合溶液，其中，KCl的浓度为500mM-2M之间，优选浓度为650mM-1.25M之间；硫酸铵的浓度为200-950mM之间，优选浓度为350-450mM之间；

(2) 土壤裂解液：为柠檬酸钠、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)、SDS和NaCl的混合溶液，混合溶液中柠檬酸钠的浓度为10-100mM之间，优选浓度为50mM；CTAB的质量浓度为0.1-1%之间，优选质量浓度为0.2-0.5%之间；SDS的质量浓度为0.2-2％之间，优选质量浓度为0.5-1％之间；NaCl的浓度为20-600mM之间，优选浓度为50-200mM之间；

(3) 杂质沉淀剂：为曲拉通X-100和EDTA的混合溶液，其中，曲拉通X-100体积比浓度为0.5-3%之间，优选体积比浓度为1-2%之间；EDTA的浓度为10-100mM之间，优选浓度为20-50mM之间；

(4) DNA结合液：为NaCl、乙酸钠和PEG8000的混合溶液，其中，NaCl的浓度为500mM-2M之间，优选浓度为1-2M之间；PEG8000质量浓度为10-30%之间，优选浓度为15-20%之间，乙酸钠的浓度为500mM-2M之间，优选浓度为1-1.5M之间，用醋酸调溶液的pH值为4-5之间，优选PH为4.5；

(5) 蛋白杂质去除液：为硫酸铵和乙醇的混合溶液，其中，硫酸铵的浓度为300mM-2M之间，优选浓度为205-450mM之间；乙醇浓度为40-60 vt％之间，优选浓度为50 vt％；

(6) DNA漂洗液：为NaCl和乙醇的混合物，其中，乙醇的浓度为65-85 vt %之间，优选浓度为75-80 vt %之间；NaCl的浓度为20-200mM之间，优选浓度为50-100mM之间；

(7) DNA洗脱液：5mM的Tris-HCl缓冲液，pH值8.0-8.5。

2.一种通过权利要求1所述的土壤DNA提取试剂盒提取土壤DNA的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1) 称取新鲜土壤0. 5-1g于2mL EP管中，加入200μL Pre-Wash溶液，在漩涡振荡器上振荡2min；

(2) 加入600μL土壤裂解液，涡旋震荡5 min至样本充分混匀；70℃孵育10 min，孵育期间震荡2-3次；

(3) 12,000 rpm离心3 min，取上清液至新的1.5ml离心管中；

(4) 将步骤(3)获得的上清液转移到新的EP管中，随后上清液加入100µL杂质沉淀剂，涡旋混匀后冰浴5min，12,000rpm离心3min；

(5) 将步骤(4) 获得的上清液转移500µL到新的EP管中，加入250µL DNA结合液和500µL 乙醇；

(6) 将步骤(5) 获得的上清混合液转移到DNA吸附硅胶柱，以12000rpm的转速离心1min，移除离心液并保留DNA吸附柱；

(7) DNA吸附柱重新放入收集管中，向DNA吸附柱中加入500μL蛋白杂质去除液，以12000rpm的转速离心2min，移除离心液并保留DNA吸附柱；

(8) 将DNA吸附柱重新放入收集管中，向DNA吸附柱中加入500μL蛋白杂质去除液，以12000rpm的转速离心2min，移除离心液并保留DNA吸附柱；

(9) 将DNA吸附柱放入收集管中，向DNA吸附柱中加入700μL DNA漂洗液，以12000rpm的转速离心2min；将收集管中的离心液移除并保留DNA吸附柱，15000rpm转速下空管离心5min；

(10) 将DNA吸附柱放入收集管中，向DNA吸附柱中加入100μL DNA洗脱液，静置2min，15000rpm转速下离心2min ，离心液即为土壤DNA溶液。