[发明专利]甲基化无创早期检测妇科肿瘤的组合物及试剂盒

权利要求书

1.甲基化无创早期检测妇科肿瘤的组合物，其特征在于，包括目标基因检测引物，用于检测目标基因的甲基化位点，所述目标基因为PTGER4、HAND2、PAX1、HOXA9、FOXD3、OPCML、HS3ST2和JAM3。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，目标基因检测引物的核苷酸序列如下所示：

PTGER4基因检测引物：SEQ ID NO:1～2；

HAND2基因检测引物：SEQ ID NO:3～4；

PAX1基因检测引物：SEQ ID NO:5～6；

HOXA9基因检测引物：SEQ ID NO:7～8；

FOXD3基因检测引物：SEQ ID NO:9～10；

OPCML基因检测引物：SEQ ID NO:11～12；

HS3ST2基因检测引物：SEQ ID NO:13～14；

JAM3基因检测引物：SEQ ID NO:15～16。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括目标基因检测探针，具体核苷酸序列如下所示：

PTGER4基因检测探针：SEQ ID NO:17；

HAND2基因检测探针：SEQ ID NO:18；

PAX1基因检测探针：SEQ ID NO:19；

HOXA9基因检测探针：SEQ ID NO:20；

FOXD3基因检测探针：SEQ ID NO:21；

OPCML基因检测探针：SEQ ID NO:22；

HS3ST2基因检测探针：SEQ ID NO:23；

JAM3基因检测探针：SEQ ID NO:24；

目标基因的检测探针5’端进行荧光标记，3’端进行MGB标记，且同一检测体系内不同的目标基因标记不同的荧光基团。

4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，荧光标记和MGB的具体标记位置如下所示：

PTGER4基因检测探针：序列5’端标记FAM，3’端标记MGB；

HAND2基因检测探针：序列5’端标ROX，3’端标记MGB；

PAX1基因检测探针：序列5’端标记CY5，3’端标记MGB；

HOXA9基因检测探针：序列5’端标记HEX，3’端标记MGB；

FOXD3基因检测探针：序列5’端标记FAM，3’端标记MGB；

OPCML基因检测探针：序列5’端标记ROX，3’端标记MGB。

HS3ST2基因检测探针：序列5’端标记CY5，3’端标记MGB；

JAM3基因检测探针：序列5’端标记HEX，3’端标记MGB。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包括内参基因GAPDH和β-actin的检测引物，具体核苷酸序列如下：

GAPDH基因检测引物：SEQ ID NO:25～26，

β-actin基因检测引物：SEQ ID NO:27～28。

6.根据权利要求5所述的组合物，其特征在于，还包括内参基因GAPDH和β-actin的检测探针，具体核苷酸序列如下：

GAPDH基因检测探针：SEQ ID NO:29，序列5’端标记JOE，3’端标记BHQ1；

β-actin基因检测探针：SEQ ID NO:30，序列5’端标记JOE，3’端标记BHQ1。

7.一种甲基化无创早期检测妇科肿瘤的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～6任一所述的组合物，以及PCR反应液。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液每一人份由浓度1U/μL的DNA Taq聚合酶0.5～1μL、浓度25mM的dNTPs 2-5μL、浓度1.5mM的Mg²⁺2-6μL、10×DNA聚合酶buffer 5μL和纯化水补足25μL组成。