[发明专利]一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法

权利要求书

1.一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：它包括以下步骤：

S1、种子的采集与处理：采集牛大力果实后取出种子，并将种子用清水浸泡，并进行消毒，再用乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，备用；

S2、组织培养：将S1步骤中得到的种子，经诱导培养和继代培养获得继代培养组织，再将继代培养组织经悬浮细胞培养获得牛大力悬浮细胞培养液；

S3、杂交育种：将包含LG1/8上的QTL的辣椒植物依照S2的步骤获得辣椒植物悬浮细胞培养液，然后将S2步骤获得的牛大力悬浮细胞培养液与辣椒植物悬浮细胞培养液混合，并且所述QTL与SEQ ID NO.1的分子标记连接，进行杂交育种，获得杂交培育组织；

S4、增殖培育：将S3步骤获得的杂交培育组织转入增殖培养基中进行增殖培育，然后再将长出的嫩芽剪下转入增殖培养基中进行继代增殖培育；

S5、生根培育：将增殖培育长出的嫩芽剪下浸泡于IBA溶液中，再接入生根培养基上诱导生根，即培育出牛大力新品种。

2.根据权利要求1所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述S1步骤中，采集果实后取出种子，并将种子用45～50℃的清水浸泡3～5天，并用0.1～0.2％高锰酸钾溶液进行消毒8～10min，再用80～85％的乙醇浸泡8s～12s，然后用无菌水冲洗3-5次，备用。

3.根据权利要求1所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述S2步骤中，所述诱导培养的方法为：将S1步骤中得到的种子接种至诱导培养基上于黑暗条件、25-30℃下诱导培养25-30天得到诱导培养组织；

所述继代培养的方法为：将诱导培养组织转接至增殖培养基上于黑暗条件、25-30℃下进行继代培养2-4次，至获得继代培养组织，其中，每次继代培养的时间为7-10天；

所述悬浮细胞培养的方法如下：将继代培养组织接种至液体培养基中，并置于转动频率为95-100r/min、温度为27℃的恒温摇床上进行悬浮细胞培养，每10-15天转接培养一次，转接培养4-6次后，得到牛大力悬浮细胞培养液。

4.根据权利要求3所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述诱导培养基的配方为：MS+20mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.5mg/L TDZ+0.2mg/L NAA+300mg/L PVP+500mg/L水解酪蛋白+30g/L蔗糖+5g/L琼脂；所述增殖培养基的配方为：MS+1.0mg/L TDZ+0.5mg/L KT+0.2mg/L NAA+300mg/L PVP+200mg/L芦荟汁+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。

5.根据权利要求1所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述S3步骤中，所述SEQ ID NO.1的51位核苷酸是C。

6.根据权利要求1所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述S3步骤中，所述SEQ ID NO.1的序列号如下：

CCCGAGGTAGACATCATACGAGGAGAATTTCCTGCT

AAAATTGAGTTGTT[T/C]TGTCAGAGGAGTCGCTCAC

ATGATAAGTATGTTGGCGAGTTAGACCTCAT。

7.根据权利要求1所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述S4步骤中，所述增殖培养基为：MS+蔗糖20g/L+卡拉胶4g/L+6-BA 3mg/L+IAA0.2mg/L+NAA 0.8mg/L，pH值为5.8。

8.根据权利要求1所述的一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，其特征在于：所述S4步骤中，所述增殖培育的条件为：温度为25-28℃，光照时间为12h/天，光照强度为1800-2000lx。