[发明专利]一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法

说明书

本发明涉及农作物培育技术领域，具体涉及一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法。该利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，以牛大力种子作为组织培养的原料，获得牛大力悬浮细胞培养液，以包含LG1/8上的QTL的辣椒植物作为组织培养的原料，再进行杂交育种，并且QTL与SEQ ID NO.1的分子标记连接，获得杂交培育组织，再通过增殖培育和生根培育，最终培育出牛大力新品种。本发明由于采用分子标记的杂交育种法，并引入了含LG1/8上的QTL的辣椒植物的基因，含LG1/8上的QTL的辣椒植物的基因具有对牛肝菌和左旋霉素的抗性，进而能减少死苗现象，整体成活率高，且培育方法简单，培育成本较低。

技术领域

本发明涉及农作物培育技术领域，具体涉及一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法。

背景技术

牛大力，别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯。是一种药材。为豆科崖豆藤属植物。牛大力以根入药，主要成份为蛋白质、淀粉质及生物碱等。牛大力主治肺热、肺虚咳嗽、肺结核、风湿性关节炎、腰肌劳损、慢性支气管炎、慢性肝炎等，是生产多种中成药的主要原料。其主要生产于我国广东、广西、海南和越南，不同牛大力种源叶片、花、果及薯的形态、长势表现各异，根系穿透力强，辐射范围大。近年来，牛大力遭受滥采滥挖，野生资源几近灭绝。因此亟需进行人工繁殖。

目前，牛大力的人工种植方法有播种育苗、扦插育苗和组织培育苗，其中，组织培育苗作为牛大力规模化繁殖的有效方法之一，然而目前多采用幼嫩茎段为外植体，消毒比较困难。另外，人工种植牛大力常出现死苗、叶片发黄、缓苗时间长、不生长等现象，牛大力的整体成活率不高。并且，目前由于牛大力的种子价格较高，导致培育成本较高。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，能够大大减少死苗现象，整体成活率高，且降低了培育成本。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

提供一种利用分子标记杂交育种法培育牛大力新品种的方法，它包括以下步骤：

S1、种子的采集与处理：采集牛大力果实后取出种子，并将种子用清水浸泡，并进行消毒，再用乙醇浸泡，然后用无菌水冲洗，备用；

S2、组织培养：将S1步骤中得到的种子，经诱导培养和继代培养获得继代培养组织，再将继代培养组织经悬浮细胞培养获得牛大力悬浮细胞培养液；

S3、杂交育种：将包含LG1/8上的QTL的辣椒植物依照S2的步骤获得辣椒植物悬浮细胞培养液，然后将S2步骤获得的牛大力悬浮细胞培养液与辣椒植物悬浮细胞培养液混合，并且所述QTL与SEQ ID NO.1的分子标记连接，进行杂交育种，获得杂交培育组织；

S4、增殖培育：将S3步骤获得的杂交培育组织转入增殖培养基中进行增殖培育，然后再将长出的嫩芽剪下转入增殖培养基中进行继代增殖培育；

S5、生根培育：将增殖培育长出的嫩芽剪下浸泡于IBA溶液中，再接入生根培养基上诱导生根，即培育出牛大力新品种。

上述技术方案中，所述S1步骤中，采集果实后取出种子，并将种子用45～50℃的清水浸泡3～5天，并用0.1～0.2％高锰酸钾溶液进行消毒8～10min，再用80～85％的乙醇浸泡8s～12s，然后用无菌水冲洗3-5次，备用。

上述技术方案中，所述S2步骤中，所述诱导培养的方法为：将S1步骤中得到的种子接种至诱导培养基上于黑暗条件、25-30℃下诱导培养25-30天得到诱导培养组织；

所述继代培养的方法为：将诱导培养组织转接至增殖培养基上于黑暗条件、25-30℃下进行继代培养2-4次，至获得继代培养组织，其中，每次继代培养的时间为7-10天；