[发明专利]一种SNP杂合样本的半定量方法在审
| 申请号： | 202110205947.6 | 申请日： | 2021-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN112899355A | 公开（公告）日： | 2021-06-04 |
| 发明（设计）人： | 万谦;蒋小辉;向俊蓓 | 申请（专利权）人： | 成都新生命霍普医学检验实验室有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6869 | 分类号： | C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 成都行之专利代理事务所(普通合伙) 51220 | 代理人： | 史丽红 |
| 地址： | 610000 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 snp 样本 定量 方法 | ||
1.一种SNP杂合样本的半定量方法，其特征在于，包括如下步骤：1)合成两个长度相同的DNA模板P-ctDNA-1和P-ctDNA-2，P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的区别在于两者序列仅在中部的同一位点存在SNP差异，即在该SNP位点上P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的碱基不同；2)合成能通过PCR完全扩增P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的引物P-ctDNA-3和引物P-ctDNA-4；3)按多种不同的比例混合P-ctDNA-1和P-ctDNA-2，得到P-ctDNA-2占比不同的DNA混合物；4)以步骤3)中混合物作为模板，以P-ctDNA-3和P-ctDNA-4为引物进行PCR扩增，然后回收条带，再以P-ctDNA-3为引物进行Sanger一代DNA测序，获得不同比例下SNP位点的测序图谱。
2.根据权利要求1所述的一种SNP杂合样本的半定量方法，其特征在于，步骤3)中按1：1、2：1、5：1、10：1、20：1的比例混合P-ctDNA-1和P-ctDNA-2，获得P-ctDNA-2占比为50％、33.3％、16.7％、9.1％、4.8％的DNA混合物。
3.根据权利要求1所述的一种SNP杂合样本的半定量方法，其特征在于，取待分析的SNP杂合样本进行Sanger一代DNA测序，获得SNP杂合样本的DNA测序图谱，对SNP杂合样本的样本杂合情况与步骤4)获得的多个不同比例下SNP位点的测序图谱进行对比分析，即获得样本的SNP杂合比例与测序图谱的半定量对应关系。
4.根据权利要求1所述的一种SNP杂合样本的半定量方法，其特征在于，模板P-ctDNA-1和P-ctDNA-2的长度均为90bp。
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