[发明专利]一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法

权利要求书

1.一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，通过构建克隆表达2-酮酸脱羧酶和D-木糖脱氢酶，木糖酸脱水酶和醇脱氢酶的基因，并将构建好的基因转入宿主菌的细胞内得重组大肠杆菌，培养重组大肠杆菌并接种至含有经预处理过的玉米芯的培养基中发酵生产D-1,2,4-丁三醇。

2.根据权利要求1所述的一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，具体步骤如下：

步骤1，构建克隆表达2-酮酸脱羧酶,D-木糖脱氢酶,木糖酸脱水酶和醇脱氢酶,得重组大肠杆菌； 步骤2，玉米芯的预处理 将氢氧化钠溶液和玉米芯混合后的悬浮水解液经121℃处理，过滤得到玉米芯残渣，将残渣用纯水洗至中性；

步骤3，发酵培养基的配制

配制5g/L酵母粉，10g/L蛋白胨，5g/L氯化钠的LB培养基，并封装于500mL锥形瓶中，装液量50mL，向LB培养基中添加2g预处理后的玉米芯残渣制成发酵培养基，灭菌待用； 步骤4，将重组大肠杆菌接种至发酵培养基中，加入半纤维素酶，再加入IPTG诱导发酵得产物D-1,2,4-丁三醇。

3.根据权利要求2所述的一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，步骤1中所述宿主菌为大肠杆菌Trans1 T1。

4.根据权利要求2所述的一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，步骤2中氢氧化钠的浓度为1mol/L，玉米芯与氢氧化钠溶液的质量体积比为1:10。

5.根据权利要求2所述的一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，步骤4中重组大肠杆菌的接种量4%，IPTG终浓度1mmol/L，初始培养温度37℃，加入诱导剂后33℃培养至发酵结束。

6.根据权利要求2所述的一种利用玉米芯同步糖化发酵生产D-1,2,4-丁三醇的方法，其特征在于，步骤4中半纤维素酶添加量为400IU。