[发明专利]三维培养血管内皮细胞的方法有效
| 申请号： | 202110209211.6 | 申请日： | 2021-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN112961821B | 公开（公告）日： | 2023-05-30 |
| 发明（设计）人： | 陈丽 | 申请（专利权）人： | 四川大学华西医院 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 成都虹桥专利事务所(普通合伙) 51124 | 代理人： | 伍云萍 |
| 地址： | 610041 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 三维 培养 血管 内皮 细胞 方法 | ||
1.三维培养血管内皮细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、配制含有浓度为1.2％～2％的甲基纤维素的DMEM培养基；所述的甲基纤维素粘稠度为4000cp；
b、将62500～375000个血管内皮细胞重悬在终体积为4ml含20％FBS的高糖DMEM完全培养基中，加入1ml步骤a的培养基，混合均匀，制备得到单细胞悬液；
c、取40μl步骤b的单细胞悬液，接种至低粘附平面，将平面翻转后，形成悬滴，将悬滴在温度37℃、CO2浓度5％的条件下进行培养，得到血管内皮细胞的微组织球体。
2.根据权利要求1所述的三维培养血管内皮细胞的方法，其特征在于：步骤a中所述的甲基纤维素浓度为1.2％。
3.根据权利要求1所述的三维培养血管内皮细胞的方法，其特征在于：步骤a中所述的甲基纤维素购自Sigma-Aldrich公司，货号为M0512。
4.根据权利要求1所述的三维培养血管内皮细胞的方法，其特征在于：步骤a所述培养基的具体配制方法为：称取6～10g甲基纤维素，转移至已经加入磁力搅拌子的500ml广口瓶中，高温高压灭菌；加热250ml DMEM基础培养基到60℃，将培养基加入灭菌完毕的甲基纤维素中，室温下磁力搅拌20min；室温下加入250ml DMEM基础培养基，然后在4℃下磁力搅拌过夜；室温下5,000g离心2小时，上清备用。
5.根据权利要求1所述的三维培养血管内皮细胞的方法，其特征在于：步骤b中的细胞浓度取决于所需微组织球体大小，内皮细胞数量可从500/球体到3000/球体。
6.根据权利要求1所述的三维培养血管内皮细胞的方法，其特征在于：步骤c所述的低粘附平面为普通无菌培养皿皿盖。
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