[发明专利]一种检测试剂及定量测定过氧化氢的方法

说明书

一种检测试剂以及定量测定过氧化氢的方法，其检测快速、灵敏、成本低且操作简便。利用铜离子(II)过氧化物酶的活性，催化过氧化氢氧化3,3′,5,5′‑四甲基联苯胺(TMB)生成氧化态TMB(即oxTMB)，使溶液颜色由无色变为蓝色；变蓝的程度与过氧化氢的浓度成正比，从而构建线性关系，确定过氧化氢的含量。所述方法具有简便、易准备、水溶性好、稳定性好和成本低等优点，可建立一种简便、快速、成本低廉的检测食品中过氧化氢的方法，在食品分析领域具有潜在的应用价值。

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种检测试剂及定量测定过氧化氢的方法。

背景技术

过氧化氢(Hydrogen peroxide，H₂O₂)俗称双氧水，是一种强氧化剂，具有漂白、防腐、杀菌和消毒作用，常作为添加剂广泛应用于食品的加工过程中。但其过量添加现象十分严重。过氧化氢进入人体可产生羟基自由基，导致细胞凋亡、加速人体衰老、诱发心血管疾病和癌症等。因此，为保障消费者安全，急需构建一种简便、快速、成本低、准确的过氧化氢检测方法。

目前过氧化氢的检测方法主要有滴定法、色谱法、化学发光法、电化学分析法、荧光光度法、紫外分光光度法等。其中，紫外分光光度法具有操作简单、快速、准确度高、选择性好、分析成本低等优点。但也存在天然酶易失活、纳米材料合成复杂、检测范围窄等不足。

发明内容

为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种定量测定过氧化氢的方法，其检测快速、灵敏、成本低且操作简便。利用铜离子(II)过氧化物酶的活性，催化过氧化氢氧化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)生成氧化态TMB(即oxTMB)，使溶液颜色由无色变为蓝色；具体的，加入不同浓度的过氧化氢，溶液颜色的变化也会不同，即过氧化氢在溶液中的浓度越大，颜色变蓝的程度越大，变蓝的程度与过氧化氢的浓度成正比，构建线性关系，从而确定过氧化氢的含量。

本发明采用的技术方案如下：

第一方面，本发明提供一种用于测定过氧化氢的检测试剂，其由铜离子(II)溶液、3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液(即TMB溶液)和缓冲溶液配制而成。

第二方面，本发明提供一种用于测定过氧化氢的检测试剂的制备方法，取铜离子(II)溶液置于具塞试管中，加入TMB溶液，随后用缓冲溶液定容后摇匀。

第三方面，本发明提供一种采用所述检测试剂测定过氧化氢的用途。具体的，提供一种利用铜离子(II)的过氧化物酶活性测定过氧化氢的用途。

优选的，利用铜离子(II)的过氧化物酶的活性，催化过氧化氢氧化3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)，使溶液颜色由无色变为蓝色，变蓝的程度与过氧化氢的浓度成正比，从而构建线性关系，确定过氧化氢的含量。

第四方面，本发明提供一种定量测定过氧化氢的方法，所述方法利用铜离子(II)的过氧化物酶活性来定量测定过氧化氢。

第五方面，本发明提供一种定量测定过氧化氢的方法，包括以下步骤：

(1)分别配制铜离子(II)溶液和3,3′,5,5′-四甲基联苯胺溶液，将两者混合均匀，再加入缓冲溶液定容后得检测试剂，测定在652nm处的紫外吸光度值A₀；

(2)向上述检测试剂中加入过氧化氢溶液，测定在652nm处的紫外吸光度值A；

(3)计算ΔA＝A-A₀，代入线性方程ΔA＝A-A₀＝0.0268C-0.0289，求得C值；其中C为过氧化氢的浓度，单位为μM。

第六方面，本发明提供一种定量测定过氧化氢的方法，包括以下步骤：

a)配制不同浓度的过氧化氢标准溶液；