[发明专利]钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法

权利要求书

1.钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法，其特征在于：以干燥钩藤为原料，依次经醇水提取、乙酸乙酯萃取富集、大孔吸附树脂柱色谱及反相半制备高效液相色谱技术进行提取、分离、纯化，得到四种生物碱富集组分，经HPLC检测四种生物碱组分总含量达90%以上；四种生物碱类化合物，分别为，钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱，其结构式如下，

钩藤碱 异钩藤碱

去氢钩藤碱 异去氢钩藤碱。

2.根据权利要求1所述钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

步骤一：钩藤中生物碱类化合物的提取：

A.将干燥的钩藤茎枝粉碎得钩藤原料；

B.按钩藤原料与乙醇水溶液为1g：5-10ml的比例混合浸泡，乙醇水溶液的体积浓度为60-80%，超声提取0.5-1小时，过滤；

C.重复B的提取过程5-6次，合并滤液，减压浓缩除去乙醇，得到钩藤粗提液；

步骤二：萃取富集钩藤中生物碱类化合物：将步骤一得到的钩藤粗提液以石油醚脱脂萃取3-5次后，再以乙酸乙酯萃取3-5次，钩藤提取物中的四种生物碱类化合物主要富集于乙酸乙酯萃取部位，将乙酸乙酯萃取部位减压浓缩至浸膏状；

步骤三：树脂柱分离生物碱类化合物；

步骤四：半制备高效液相色谱技术纯化样品：

色谱条件为：

色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（5μm，10 mm×250mm）；

流动相：0.1%三乙胺-磷酸（A）：乙腈（B）=45：55（V/V）；

流速：5 mL/min；

洗脱时间：30min；

柱温：30℃；

检测波长：254nm；

富集方法：将步骤三中所获得的钩藤中四种生物碱组分浸膏分别以30%-40%乙醇溶解后，以半制备高效液相色谱技术进一步纯化，收集8-11min流出液，减压浓缩除去乙醇后，冷冻干燥得淡黄色干粉；高效液相检测生物碱类化合物含量可达90%以上；

萃取操作时，钩藤粗提液与石油醚的体积比为1:1-2，钩藤粗提液与乙酸乙酯的体积比为1:1-2；减压浓缩时，提取液加热浓缩的温度为50-70℃；所述大孔吸附树脂为非极性大孔吸附树脂。

3.根据权利要求2所述钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法，其特征在于：所述树脂柱分离生物碱类化合物，是将步骤二所得浸膏，以体积浓度20%-30%乙醇溶解后，过滤，以D3520型号大孔吸附树脂为填料装柱分离，依次以5-10倍柱体积的水、体积浓度10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液进行洗脱，收集10%-70%部位的流份，减压浓缩至浸膏状，高效液相色谱检查四种钩藤碱含量为20%以上。

4.根据权利要求2所述钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法，其特征在于：所述树脂柱分离生物碱类化合物，是将步骤二所得浸膏以体积浓度20%-30%乙醇溶解后，过滤，以D101型号大孔吸附树脂为填料装柱分离，依次以5-10倍柱体积的水、体积浓度10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液进行洗脱，收集10%-60%部位的流份，减压浓缩至浸膏状，高效液相色谱检查四种钩藤碱含量为20%以上。

5.根据权利要求2所述钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法，其特征在于：所述树脂柱分离生物碱类化合物，是将步骤二所得浸膏以体积浓度20%-30%乙醇溶解后，过滤，以AB8型号大孔吸附树脂为填料装柱分离，依次以5-10倍柱体积的水、体积浓度10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%乙醇溶液进行洗脱，收集40%-60%部位的流份，减压浓缩至浸膏状，高效液相色谱检查四种钩藤碱含量为20%以上。