[发明专利]钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法

说明书

一种钩藤中结构性质相近的四种生物碱组分的富集纯化方法，属于有效成分开发利用领域。钩藤中该类化合物富集分离的主要工艺步骤为：将干燥的钩藤药材粉碎后，以5‑10倍量60‑80%乙醇超声提取，石油醚脱脂后，以乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩至浸膏状。所得浸膏通过大孔吸附树脂初步纯化，再以反相半制备高效液相色谱进一步纯化，即可得含量90%以上的四种生物碱组分。本发明采用多种柱色谱技术富集纯化钩藤中生物碱类化合物，工艺简单，易操作，制成品中生物碱类含量高，所用树脂均可回收利用，易于工业化。

技术领域

本发明涉及生物碱，具体地说是钩藤中结构性质相近的四种生物碱组分的富集纯化方法。

背景技术

钩藤（Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.exHavil.）中活性成分主要是生物碱，主要包括钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱等成分，药理作用广泛，具有清热平肝、息风止痉等功效，在心血管疾病、中枢神经系统疾病等方面也有显著疗效。近年来研究表明，钩藤总碱对神经元有保护作用，可改善阿尔茨海默病（AD）患者的学习能力，并对白血病、艾滋病有特殊的治疗作用。生物碱类化合物在钩藤中含量较低且未有成熟的提取纯化方法，目前主要依靠化学合成制得，化学方法合成化合物药物时存在较强的毒副作用，因此建立从天然植物中提取纯化该类化合物的方法有重大的现实意义。

钩藤（Uncariarhynchophylla(Miq.)Miq.exHavil.）原名钓藤，为茜草科（Rubiaceae）钩藤属（UncariaSchred.）多年生草本植物，在我国福建、江西、湖南、广东、广西、贵州、四川等省份均有种植。生物碱是钩藤药材中主要活性成分，主要为吲哚生物碱和氧化吲哚生物碱，其中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量较高，且这四种生物碱结构相近，具有相似的药理活性，从钩藤中同时富集纯化这四种生物碱具有较高的经济价值。

发明内容

本发明提供一种从钩藤中富集纯化生物碱类化合物的方法，以满足化合物标准品制备，药理活性进一步研究及工业应用的需求；发明首先优化了钩藤药材中生物碱类化合物的提取方法，通过大孔吸附树脂法分离纯化及半制备液相色谱技术富集，得到纯度较高的生物碱类化合物。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

钩藤中四种生物碱组分的富集纯化方法，以干燥钩藤为原料，依次经醇水提取、乙酸乙酯萃取富集、大孔吸附树脂柱色谱及反相半制备高效液相色谱技术进行提取、分离、纯化，得到四种生物碱富集组分，经HPLC检测四种生物碱组分总含量达90%以上；四种生物碱类化合物，分别为，钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱，其结构式如下，

钩藤碱 异钩藤碱

去氢钩藤碱 异去氢钩藤碱。

具体包括如下步骤：

步骤一：钩藤中生物碱类化合物的提取：

A.将干燥的钩藤茎枝粉碎得钩藤原料；

B.按钩藤原料与乙醇水溶液为1g：5-10ml的比例混合浸泡，乙醇水溶液的体积浓度为60-80%，超声提取0.5-1小时，过滤；

C.重复B的提取过程5-6次，合并滤液，减压浓缩除去乙醇，得到钩藤粗提液；

步骤二：萃取富集钩藤中生物碱类化合物：将步骤一得到的钩藤粗提液以石油醚脱脂萃取3-5次后，再以乙酸乙酯萃取3-5次，钩藤提取物中的四种生物碱类化合物主要富集于乙酸乙酯萃取部位，将乙酸乙酯萃取部位减压浓缩至浸膏状；

步骤三：树脂柱分离生物碱类化合物；

步骤四：半制备高效液相色谱技术纯化样品：

色谱条件为：

色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱（5μm，10 mm×250mm）；