[发明专利]糖蛋白的糖链游离法

权利要求书

1.一种从糖蛋白游离出糖链的方法，其中，包括：

使包含(a)羟胺类和(b)碱性试剂的反应液与所述糖蛋白接触而获得从所述糖蛋白游离出的糖链与所述反应液的混合液的工序，

所述糖链是通过O-糖苷键与蛋白质连结的O键型糖链，

所述(b)碱性试剂为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯、氢氧化锂、1,1,3,3-四甲基胍、或十六烷基三甲基氢氧化铵，

所述反应液包含质量百分比为2～70％的所述(a)羟胺类，

所述(b)碱性试剂为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯时，所述反应液中的所述(b)碱性试剂的浓度为超过200mM且2.0M以下，

所述(b)碱性试剂为氢氧化锂时，所述反应液中的所述(b)碱性试剂的浓度为超过100mM且2.0M以下，

所述(b)碱性试剂为1,1,3,3-四甲基胍或十六烷基三甲基氢氧化铵时，所述反应液中的所述(b)碱性试剂的浓度为2mM以上且2.0M以下。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

所述反应液还包含(c)胺类。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，

所述(c)胺类是从由氨水和邻氨基苯甲酸组成的组中选出的至少一种化合物。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中，

从所述糖蛋白游离出的糖链包含糖链肟。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中，

在使所述反应液与所述糖蛋白接触的工序中，所述反应液的pH在8～14的范围内。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中，

所述(a)羟胺类是从由羟胺、羟胺的盐、O-取代羟胺及O-取代羟胺的盐组成的组中选出的至少一种化合物。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其中，还包括：

向所述混合液中添加酮、醛或酸酐，将残留在所述混合液中的(a)羟胺类转化为酮肟、醛肟或酰胺的工序；

使所述混合液与对糖链具有亲和性的固相接触而使从所述糖蛋白游离出的糖链吸附于所述固相的工序；以及

从所述固相洗脱所述糖链的工序。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其中，

所述(b)碱性试剂为1,8-二氮杂双环[5.4.0]十一碳-7-烯，所述反应液中的(b)碱性试剂的浓度为600mM以上且2.0M以下。

9.一种糖链的分析方法，其是糖蛋白所具有的糖链的分析方法，所述分析方法包括：

通过权利要求1至7中任一项所述的方法从糖蛋白游离出糖链的工序；以及

对所游离出的糖链进行标记且包含糖链肟的标记的工序。

10.一种试剂盒，其是用于通过权利要求1至7中任一项所述的方法从糖蛋白游离出糖链的试剂盒，其中，所述试剂盒包含所述(a)羟胺类和所述(b)碱性试剂。

11.根据权利要求10所述的试剂盒，其中，还包含(c)胺类。

12.根据权利要求10或11所述的试剂盒，其中，还包含：酮、醛或酸酐；以及对糖链具有亲和性的固相。

13.根据权利要求10或11所述的试剂盒，其中，还包含用于实施权利要求1至7中任一项所述的方法的说明书。

14.一种试剂盒，其是用于通过权利要求1至7中任一项所述的方法从糖蛋白游离出糖链的试剂盒，其中，所述试剂盒包含用于与所述(a)羟胺类并用的所述(b)碱性试剂和(c)胺类。

15.根据权利要求14所述的试剂盒，其中，还包含：酮、醛或酸酐；以及对糖链具有亲和性的固相。