[发明专利]一种用于HRAS G13R突变检测的引物、探针以及试剂盒

权利要求书

1.一种用于HRAS G13R突变检测的引物及探针，其特征在于：所述引物及探针包括等位基因特异性引物和探针以及等位基因非特异性引物和探针，其中所述等位基因特异性引物和探针序列如下：

上游引物：5’-TCCTTGGCAGGTGGGGCA-3’

下游引物：5’-CGCACTCTTGCCCACACG-3’

探针：FAM-5’-TGAGGAGCGATGACGGAAT-3’-MGB

所述等位基因非特异性引物和探针序列如下：

上游引物：5’-TCCTTGGCAGGTGGGGCA-3’

下游引物：5’-CGCACTCTTGCCCACAC-3’

探针：FAM-5’-TGAGGAGCGATGACGGAAT-3’-MGB。

2.一种包含权利要求1所述的引物及探针的用于HRAS G13R突变检测的试剂盒。

3.根据权利要求2所述的一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括PCR技术常用试剂，所述PCR技术常用试剂与引物及探针组成PCR反应液。

4.根据权利要求3所述的一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，其特征在于：PCR反应液的总反应体系的体积为10μl，所述总反应体系包括以下组分：10×PCR buffer、热启动Taq酶、dNTP、MgCl₂、引物以及探针组合物、样本DNA模板。

5.根据权利要求4所述的一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，其特征在于：待测样本为血液中cfDNA时，所述试剂盒中的样本DNA模板是以cfDNA为模板，经过一轮PCR扩增反应后的产物再经过稀释所得；该PCR扩增反应时总反应体系的体积为20μl，总反应体系包括以下组分：10×PCR buffer、热启动Taq酶、dNTP、MgCl₂、引物以及探针、cfDNA模板；PCR扩增反应条件为：94℃ 3分钟；94℃ 30秒，55℃ 20秒，68℃ 20秒，30个循环；68℃ 5分钟；4℃保存。

6.根据权利要求5所述的一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，其特征在于：经过一轮PCR扩增反应时所述引物以及探针的序列如下：

上游引物：5’-TCCTTGGCAGGTGGGGCA-3’

下游引物：5’-CGCACTCTTGCCCACAC-3’

探针：FAM-5’-TGAGGAGCGATGACGGAAT-3’-MGB。

7.根据权利要求3-6任一项所述的一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒对待检样本进行检测时，其反应条件如下：95℃，10分钟；95℃，15秒，60℃，1分钟，40个循环。

8.根据权利要求3所述的一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品和空白对照。