[发明专利]一种用于HRAS G13R突变检测的引物、探针以及试剂盒

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于HRAS G13R突变检测的引物、探针以及试剂盒。试剂盒包括等位基因特异性引物、探针以及等位基因非特异性引物和探针、PCR技术常用试剂，所述PCR常用试剂与引物及探针组成PCR反应液。该试剂盒可以有效、准确检测出样本中HRAS G13R的突变，具有较高的特异性和灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于HRAS G13R突变检测的引物、探针以及试剂盒。

背景技术

RAS基因的突变于30多年前在癌症中首次被报道，此后的大量研究证实突变的RAS是肿瘤启动和维持的驱动因素(Cox and Der, 2010)。3个人类RAS基因，即Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源(KRAS)、神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源基因(NRAS)和Harvey大鼠肉瘤病毒癌基因同源基因(HRAS)编码四种RAS蛋白。RAS蛋白(KRAS4A、KRAS4B、NRAS和HRAS)作为GDP-GTP调节的二元开关，调节控制各种正常细胞过程的细胞质信号网络。HRAS基因负责编码一种叫做H-ras的蛋白，该蛋白属于RAS/MAPK通路中的一部分，负责控制转录活动和细胞循环周期，与细胞增殖相关。当HRAS基因发生致病性突变，H-ras蛋白处于持续激活状态，导致细胞增殖失控，形成肿瘤。HRAS G13R突变见于甲状腺癌和膀胱癌等恶性肿瘤，所以对HRAS突变进行基因检测具有越来越重要的临床意义。

现有技术中用于检测HRAS G13R突变的待测样本有组织、细胞以及血液中游离DNA（cell free DNA，cfDNA，）；血液中游离DNA（cell free DNA，cfDNA，）是指外周循环血中游离于细胞外的部分降解了的机体内源性DNA，且血液游离DNA具有肿瘤组织细胞DNA一致的基因突变类型，通过血液游离DNA基因突变的检测，可以对相应疾病进行预警，并有利于进一步对疾病进行分型评价，cfDNA可作为肿瘤无创检测的新一代标志物。然而cfDNA在血液中含量较低，目前的检测技术主要有新一代测序（NGS）、数字PCR、ARMS-PCR以及Sanger测序对HRAS点突变进行检测，但是其灵敏度和特异性均不能满足微量样品的检测需求。

发明内容

本发明的第一个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供一种用于HRAS G13R突变检测的引物及探针。

为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：

一种用于HRAS G13R突变检测的引物及探针，所述引物以及探针包括等位基因特异性引物和探针以及等位基因非特异性引物和探针，其中所述等位基因特异性引物以及探针序列如下：

上游引物：5’-TCCTTGGCAGGTGGGGCA-3’

下游引物：5’-CGCACTCTTGCCCACACG-3’

探针：FAM-5’-TGAGGAGCGATGACGGAAT-3’-MGB

所述等位基因非特异性引物以及探针序列如下：

上游引物：5’-TCCTTGGCAGGTGGGGCA-3’

下游引物：5’-CGCACTCTTGCCCACAC-3’

探针：FAM-5’-TGAGGAGCGATGACGGAAT-3’-MGB。

本发明的第二个目的在于：针对现有技术存在的不足，提供一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒。

为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：

一种用于HRAS G13R突变检测的试剂盒，所述试剂盒包括所述的等位基因特异性引物和探针以及等位基因非特异性引物和探针组成的引物和探针组合物。

作为一种改进的技术方案，所述试剂盒还包括PCR技术常用试剂，所述PCR常用试剂与引物及探针组成PCR反应液。