[发明专利]一种食用菌的冷冻保藏方法

说明书

本发明公开了一种食用菌的冷冻保藏方法，涉及食用菌保藏技术领域。其包括如下步骤：以珍珠岩为载体，待保藏的食用菌的菌丝蔓延生长至珍珠岩的内部孔隙后，将生长有待保藏食用菌的珍珠岩进行冷冻保藏，并在进行冷冻保藏前添加冷冻保护剂。该方法以珍珠岩为载体，由于珍珠岩具有多孔结构，且其本身不含可利用的营养成分，可作为菌丝附着基质。从而使得食用菌的菌丝能够蔓延生长至珍珠岩的空隙结构内，同时冷冻保护剂也可大量进入孔隙，从而对菌株形成有效保护，可提高菌株的保藏存活率。珍珠岩本身并不含水，将长有食用菌的珍珠岩直接进行冷冻保藏，能避免含水量高的培养基对菌丝体细胞的破坏，从而提升菌体的成活率和萌发率。

技术领域

本发明涉及食用菌保藏技术领域，具体而言，涉及一种食用菌的冷冻保藏方法。

背景技术

在食用菌领域，菌种是食用菌生产的关键，同时也是国家重要的种质资源，是生产和科学研究的基本材料。菌种保藏的目的在于使所需保藏的菌株保持生物活性，不发生衰退和变异，不因为保持其存活需要定期转接而发生菌种污染。菌种保藏能尽可能接近原始菌株的状态以满足研究及使用等诸多方面的要求。

目前，食用菌的保藏主要为使用菌丝保藏法和液氮保藏法保藏。其中，液氮保藏法主要是将食用菌接种到不同基质的培养基上，将长满菌丝的培养基打孔或者划块后，以5％-10％浓度的甘油作为保护剂，通过程序降温仪降至-90℃后放入液氮罐中长期保藏。

由于液氮保藏法保藏的菌株经过复苏后能保持生物活力，因此被广泛采用。

但是，目前存在冻存后的菌株复苏后成活率低，萌发率低的问题。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种食用菌的冷冻保藏方法以解决上述技术问题。

针对目前存在的冻存后的菌株复苏后成活率低，萌发率低的问题，发明人发现致使冻存后的菌株复苏后成活率低的原因在于，现有的冻存方法中会将部分的带有待保藏菌株的培养基置于冻存管中保藏，以PDA培养基为例，由于PDA培养基本身的含水量较高，在程序降温或者复苏回温的过程中，由于水分在低温条件下形成的冰晶易造成菌丝体细胞膨胀，外部冰晶对细胞形成挤压，使细胞受到破坏，致使菌体的成活率降低，萌发率低。

发明人提供了一种新的思路以解决上述技术问题，提供了一种新的保藏基质以保障菌株复苏后成活率。

本发明是这样实现的：

一种食用菌的冷冻保藏方法，其包括如下步骤：以珍珠岩为载体，待保藏的食用菌的菌丝蔓延生长至珍珠岩的内部孔隙后，将生长有待保藏食用菌的珍珠岩进行冷冻保藏，并在进行冷冻保藏前添加冷冻保护剂。

以珍珠岩为载体，由于珍珠岩具有多孔结构，且其本身不含可利用的营养成分，可作为菌丝附着基质。从而使得食用菌的菌丝能够蔓延生长至珍珠岩的空隙结构内，同时冷冻保护剂也可大量进入孔隙，从而对菌株形成有效保护，可提高菌株的保藏存活率。

珍珠岩本身并不含水，将长有食用菌的珍珠岩直接进行冷冻保藏，能避免含水量高的培养基对菌丝体细胞的破坏，从而提升菌体的成活率和萌发率。

与现有的常规方法相比，本发明提供的冷冻保藏方法保藏后的菌体萌发速度快，且成活率大幅提升。

使用本发明提供的方法，具有如下有益效果：菌丝体成活率高、萌发速度快、菌丝生长旺盛，解决了食用菌在使用和传代过程中容易发生污染、变异、甚至死亡，导致菌种衰退，菌株丢失的问题。

在一种实施方式中，上述的冷冻保藏方法包括：先将珍珠岩置于培养基上，然后将待保藏的食用菌接种至培养基上，培养至菌丝蔓延生长至珍珠岩的内部孔隙后，将生长有待保藏食用菌的珍珠岩进行冷冻保藏。