[发明专利]一种肠源外泌体的制备方法

权利要求书

1.一种肠源外泌体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1接种密度为1×10⁵个/孔的Caco-2细胞于DMEM培养基中培养20~22天；

S2将脂多糖溶于DMEM培养基中，接着加入步骤S1培养的Caco-2细胞中培养1~2h，得肠炎模型细胞；

S3将铁皮石斛葡甘聚糖溶于DMEM培养基中，接着加入步骤S2得到的肠炎模型细胞进行培养，收集细胞上清，离心除细胞沉淀，得上清液；

S4将步骤S3得到的上清液进行超速离心，取沉淀，即得；

所述步骤S2中DMEM培养基中脂多糖的浓度为1μg/mL；

所述步骤S3中DMEM培养基中铁皮石斛葡甘聚糖的浓度为0.5mg/mL。

2.如权利要求1所述的肠源外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1、步骤S2和步骤S3中的DMEM培养基为高糖型DMEM培养基，所述高糖型DMEM培养基还含有10%热灭活后的胎牛血清，100 U/mL链霉素和100 U/mL青霉素。

3.如权利要求1所述的肠源外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中Caco-2细胞的培养步骤为：将接种后的Caco-2细胞放入5% CO₂、温度为37℃、饱和湿度的条件下进行培养，待Caco-2细胞生长至80-90%后，接种至transwell板基底上端，每1~2天换液一次。

4.如权利要求1所述的肠源外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中的离心条件为：在900~1100g条件下离心1~2min。

5.如权利要求1所述的肠源外泌体的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中的超速离心条件为：在11000~12000g的条件下超速离心12h。

6.如权利要求1~5任一所述的肠源外泌体的制备方法制得的外泌体在制备治疗结肠炎症药物中的用途。