[发明专利]一种胚胎脊髓体外培养体系、胚胎脊髓体外缺氧损伤模型的建立方法及应用

权利要求书

1.一种胚胎脊髓体外长期培养体系，其特征在于：包括培养基和生物亲和性滤膜，所述培养基为5％explant culture medium：DMEM/F12+5％FBS+P/S+Glucose，培养基中Glucose浓度为6.5mg/ml；其中P/S包括青霉素(P)50μg/ml及链霉素(S)25μg/ml；

所述生物亲和性滤膜为White FHLC Membrane。

2.一种胚胎脊髓体外短期培养体系，其特征在于：包括培养基和生物亲和性滤膜，所述培养基为1％explant culture medium：DMEM/F12+1％FBS+1％N2+2％B27+15nM T3+P/S+Glucose；培养基中Glucose浓度为6.5mg/ml；其中P/S包括青霉素(P)50μg/ml及链霉素(S)25μg/ml；所述生物亲和性滤膜为Mixed Cellulose Esters Membrane。

3.如权利要求1所述的一种胚胎脊髓体外长期培养体系或权利要求2所述的一种胚胎脊髓体外短期培养体系在胚胎脊髓体外培养中的应用，所述胚胎脊髓体外培养的方法包括将食品级不锈钢环放置孔板内，并加入体外培养的培养基，将胚胎脊髓从背侧分开，平摊在生物亲和性滤膜上，室管膜部分朝上，将生物亲和性滤膜放置于孔板的钢环上，37℃，5％二氧化碳状态漂浮培养，隔天半换培养基。

4.一种胚胎脊髓的体外缺氧损伤模型的建立方法，其特征在于，包括：将胚胎期E13.5时期的小鼠脊髓按照如权利要求3中所述的胚胎脊髓体外培养的方法培养，体外培养2天后进行缺氧处理，2天后恢复正常氧浓度，继续长期培养即可。

5.如权利要求4所述的一种胚胎脊髓的体外缺氧损伤模型的建立方法在建立脊髓缺氧损伤模型中的应用。

6.如权利要求4所述的一种胚胎脊髓的体外缺氧损伤模型的建立方法在髓鞘发育再生研究中的应用。

7.如权利要求4所述的一种胚胎脊髓的体外缺氧损伤模型的建立方法在脊髓缺氧损伤再生药物筛选中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述应用的应用方法中，药物筛选过程中药物的使用时间为恢复正常氧浓度后一天进行药物干预，继续培养16天后，进行相关参数的检测。