[发明专利]一种超长链核酸合成生产工艺

说明书

本发明公开了一种超长链核酸合成生产工艺，包括以下步骤：第一步、微量合成柱的制备；第二步、超长链核酸合成；第三步、超长链氨解处理；本发明提供一种超长链核酸合成生产工艺，合成开始先使用盖帽反应一至两次，便于引物充分固定在固相载体上，提高引物得率，降低小分子残留含量，载体体积小，利于试剂充分接触反应，其次2000A的CPG粉增加了粉尘间的间隙，不易造成载体内部空隙的堵塞，利于反应的持续充分发应，针对企业而言合成超长链工艺的完善，能够降低全基因生产难度及引物使用成本，缩短的生产周期及交付周期。提高企业在行业中的竞争力。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体的，涉及一种超长链核酸合成生产工艺。

背景技术

超长链核酸合成工艺能有效改善引物合成质量。超长链引物合成能降低引物设计难度，减少后续PCR扩增次数，从而降低PCR扩增及检测中出现问题发生的概率，降低引物使用成本，提高引物质量，缩短产品的交付周期，换言之，用更低的成本合出更优的产品，现在市场上引物合成技术相对而言较为成熟，但合成的引物序列长度有限，一般高于120bp，合成出的引物质量明显较差。换言之，如果有引物合成公司能够提高碱基序列长度，必然能提高企业在行业中的地位。其次，微量合成超长链工艺的完善，能够降低全基因生产难度及引物使用成本，缩短的生产周期及交付周期。提高企业在行业中的竞争力。但现有的超长链核酸合成生产工艺繁琐，操作不变，产物纯度低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种超长链核酸合成生产工艺。

本发明需要解决的技术问题为：

现有技术中，超长链核酸合成生产工艺繁琐，操作不变，合成出的引物质量明显较差，产物纯度低。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种超长链核酸合成生产工艺，包括以下步骤：

第一步、微量合成柱的制备

1）称取购买30-40umol/g的2000A通用CPG粉，以CPG：聚乙烯=1：28.8的比例称取，混匀，得到S1粉并用密封干燥容器装好备用；

2）取制作好的模具，模具布有孔直径为4mm，高为2mm上下贯通的圆柱形空孔；将制好的S1粉填充严实到模具孔中，孔上下用平面玻璃密封卡紧，做好备用S2；

3）将烘箱打开，温度设置到200℃，当烘箱加热到200℃，打开烘箱将S2放进烘箱，打开烘箱此时注意使温度降到170℃左右，关闭烘箱加热至196℃时将模具取出，烧制时间控制在25min左右，如果温度提前到达196℃，可适当将烘箱门打开，低温烧制时间稍长点不影响，保证烧制出的载体切开有颗粒状即可，模具取出冷却后，用直径3.8mm的圆柱形工具将载体捅出，将边缘及表面完整的载体挑出，用密封干燥容器装好备用S3。

4）取定做的上内直径为4.5mm，下内直径为3.2mm的合成空柱，将S3用工具捅至适当位置，保证载体与空柱接触无间隙，制成微量合成柱S4,用密封干燥容器装好备用。

第二步、超长链核酸合成

1）单体用无水乙腈按1:40比例溶解，加入分子筛除水备用；

2）调节仪器参数，清洁仪器，检测仪器试剂喷打及仪器密封；

3）设定试剂参数，仪器单次反应试剂量设定；

4）程序设置：通过压力调节试剂渗透使试剂充分反应，开始合成前用乙腈清洗微量合成柱，并优先进行一次盖帽反应，去除游离羟基。因合成链过长，可采用分段合成，在合成到60以上碱基时，可适当增加单体反应遍数，并适当加长试剂反应时长。以便充分反应。

5）合成结束，通过对收集的DMT颜色，来大概判断此次合成效果。

第三步、超长链氨解处理