[发明专利]氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用有效
| 申请号： | 202110220197.X | 申请日： | 2021-02-26 |
| 公开（公告）号： | CN112941018B | 公开（公告）日： | 2023-04-28 |
| 发明（设计）人： | 陈国凯;孟雅 | 申请（专利权）人： | 澳门大学 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;A61K35/34;A61P9/00 |
| 代理公司： | 成都超凡明远知识产权代理有限公司 51258 | 代理人： | 王晖;刘书芝 |
| 地址： | 中国澳门*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 氯离子 阻断剂 诱导 干细胞 化成 心肌 细胞 方法 与其 应用 | ||
1.一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法，其特征在于，包括以下步骤：
在所述干细胞分化的第1天向含有所述干细胞的分化培养基中加入WNT通路激活剂以诱导所述干细胞向中胚层分化；
于含有分化第3-5天的干细胞的分化培养基中加入氯离子通道阻断剂处理3天以诱导所述干细胞向心肌方向分化；其中
所述氯离子通道阻断剂为DIDS、DCEBIO或Ivermectin；
所述DIDS的添加浓度为2-4μmol/L；
所述DCEBIO的添加浓度为2-2.5μmol/L；
所述Ivermectin的添加浓度为2-2.5μmol/L；
所述干细胞为人多能干细胞，所述人多能干细胞为人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分化培养基的成分包括DMEM/F12、L-抗坏血酸-2-磷酸镁、钠硒、转铁蛋白、脂质浓缩物及青链霉素。
3.根据权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于，所述WNT通路激活剂为GSK3β抑制剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述GSK3β抑制剂为CHIR99021。
5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述干细胞向中胚层分化后，去除所述WNT通路激活剂1天后，再加入所述氯离子通道阻断剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括在氯离子通道阻断剂处理结束后使用含有胰岛素的分化培养基进行培养；所述分化培养基中胰岛素的浓度为5-20 μg/mL。
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