[发明专利]氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用

说明书

本发明公开了一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用，属于人多能干细胞向心肌细胞分化调控技术领域，其包括以下步骤：于含有分化第3‑5天的干细胞的分化培养基中加入氯离子通道阻断剂以诱导干细胞向心肌方向分化。该方法的特点是采用氯离子阻断剂来诱导干细胞向心肌方向分化。本申请详细阐述了该方法的具体操作步骤，并对分化的心肌细胞进行了鉴定和功能分析，为人多能干细胞来源的心肌细胞的产生提供了新思路。

技术领域

本发明涉及人多能干细胞向心肌细胞分化调控技术领域，具体而言，涉及一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法及心肌细胞与其应用。

背景技术

人类多能干细胞(hPSCs)可以分化为我们体内的所有细胞类型，是研究人类胚胎发育的重要模型系统。通过hPSC分化产生的特定细胞类型在药物筛选研究中有极大的作用，可为药物筛选提供材料。

但目前并没有有关氯离子通道阻断剂对心肌分化影响的相关报道。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法以解决上述技术问题。

本发明的目的之二在于提供一种经上述方法得到的心肌细胞。

本发明的目的之三在于提供一种原料含有上述心肌细胞的药物。

本申请可这样实现：

第一方面，本申请提供一种氯离子阻断剂诱导干细胞分化成心肌细胞的方法，包括以下步骤：

于含有分化第3-5天的干细胞的分化培养基中加入氯离子通道阻断剂以诱导干细胞向心肌方向分化。

在可选的实施方式中，干细胞为人多能干细胞。

在可选的实施方式中，人多能干细胞包括人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞中的至少一种。

在可选的实施方式中，氯离子通道阻断剂包括DIDS、DCEBIO和Ivermectin中的至少一种。

在可选的实施方式中，DIDS的添加浓度为1-5μmol/L。

在可选的实施方式中，DCEBIO的添加浓度为2-20μmol/L。

在可选的实施方式中，Ivermectin的添加浓度为1-5μmol/L。

在可选的实施方式中，氯离子通道阻断剂的处理时间为3-5天。

在可选的实施方式中，分化培养基的成分包括DMEM/F12、L-抗坏血酸-2-磷酸镁、钠硒、转铁蛋白、脂质浓缩物及青链霉素。

在可选的实施方式中，还包括在干细胞分化的第1天向含有干细胞的分化培养基中加入WNT通路激活剂以诱导干细胞向中胚层分化。

在可选的实施方式中，WNT通路激活剂为GSK3β抑制剂，优选为CHIR99021。

在可选的实施方式中，干细胞向中胚层分化后，去除WNT通路激活剂1天后，再加入氯离子通道阻断剂。

在可选的实施方式中，还包括在氯离子通道阻断剂处理结束后使用含有胰岛素的分化培养基进行培养。

在可选的实施方式中，分化培养基中胰岛素的浓度为5-20μg/mL。

第二方面，本申请提供一种心肌细胞，其经上述方法分化培养得到。

第三方面，本申请提供一种药物，其原料含有上述心肌细胞。

本申请的有益效果包括：