[发明专利]一种藜麦下胚轴离体再生方法

权利要求书

1.一种高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）无菌苗的制备：用高猛酸钾消毒，再用次氯酸钠消毒，清洗后放入基本培养基MS中培养；

（2）愈伤组织的诱导：选取（1）中培养的无菌苗，在其子叶刚展开时，用解剖刀切取下胚轴，接种于愈伤诱导培养基上，其中，所述愈伤诱导培养基为MS作为基本培养基， 6-苄氨基嘌呤添加量为0.2 -0.3mg/L，萘乙酸添加量为2-3 mg/L，且两者的用量比例为1：10，脯氨酸添加量为0.1-0.2 mg/L；将其在黑暗条件培养，培养时间为10-15 d；

（3）不定芽诱导培养：将步骤（2）获得的愈伤组织接种至不定芽诱导培养基上，其中所述不定芽诱导培养基使用MS作为基本培养基，添加1mg/L 6-苄氨基嘌呤与0.1-0.3 mg/L萘乙酸；

（4）不定芽伸长培养：将步骤(3)中产生的不定芽诱导出的丛芽分成单株接种至不定芽伸长诱导培养基，其中不定芽伸长诱导培养基使用MS作为基本培养基，添加0.1mg/L 6-苄氨基嘌呤与0.01-0.05 mg/L 萘乙酸；

（5）生根诱导：取步骤（4）的单个芽伸长后的茎节段，放入生根培养基上，其中生根诱导培养基为MS作为基本培养基，添加0.4-0.6mg/L 3-吲哚丁酸，于光下培养。

2.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，进一步包括下述步骤：

（6）炼苗与移栽：挑选第（5）步中已生根且长势健壮的瓶苗进行炼苗，炼苗方法为：将培养瓶盖打开，注入0.5-1cm清水，置于室温、自然光照下，静置2-3天，将瓶苗掏出，将基部附着的培养基洗净，准备移栽；移栽基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石=3：1：1，移栽前将基质连盆浸入水中使其完全润湿。

3.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，所使用的培养基中均添加蔗糖30 g/L，琼脂粉5.5 g/L，调节培养基pH值为5.8。

4.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，第（2）步中切取的下胚轴的长度为1-3mm。

5.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，第（3）-（5）步培养条件为20-25℃，光照强度2000-3000lx，光照12h/d。

6.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，第（1）步中，是先使用5‰高猛酸钾消毒3分钟，再用10%的次氯酸钠消毒12分钟，清洗后放入基本培养基MS中培养。

7.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，第（3）步中，所述不定芽诱导培养基中的6-苄氨基嘌呤添加量为1mg/L，萘乙酸添加量为0.1mg/L。

8.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，愈伤诱导培养基中添加0.2 mg/L 6-苄氨基嘌呤和2 mg/L萘乙酸。

9.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，愈伤诱导培养基中添加脯氨酸的量为0.1 mg/L。

10.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，第（4）步中，不定芽伸长诱导培养基中，6-苄氨基嘌呤添加量为0.1mg/L，萘乙酸添加量为0.01 mg/L。

11.如权利要求1所述的高效藜麦下胚轴离体再生方法，其特征在于，第（5）步中，生根诱导培养基中，添加3-吲哚丁酸0.5 mg/L。