[发明专利]一种检测克罗诺杆菌的纸基检测装置及其应用

说明书

一种检测克罗诺杆菌的纸基检测装置及其应用，属于食品安全技术领域。为了解决利用传统微生物学方法以及分子生物学方法检测克罗诺杆菌中存在的问题，本发明提供了一种纸基检测装置，所述纸基检测装置的检测原理为克罗诺杆菌经超声破碎处理可产生胞内酶α‑葡萄糖苷酶，可在经底物XαGlc修饰的纸基检测装置上发生特异性酶‑底物反应，进而能够在纸基装置上快速、直观对克罗诺杆菌进行定性与定量。本发明获得的纸基检测装置具有制作方法简单、成本低以及装置灵敏度高等特点，可用于实时检测食品及食品加工过程中的克罗诺杆菌污染，尤其是婴幼儿配方奶粉生产中的克罗诺杆菌污染。

技术领域

本发明涉及一种检测克罗诺杆菌的纸基检测装置及其应用，属于食品安全技术领域。

背景技术

近年来，随着一系列涉及食源性致病菌的奶粉召回和重大感染事件的爆发，克罗诺杆菌的污染问题引起了全世界的关注。克罗诺杆菌能够污染婴幼儿配方乳粉(PIF)引起新生儿严重的菌血症、坏死性小肠结肠炎以及脑膜炎等疾病，与其他食源性致病菌相比，该菌感染率不高，但对于特殊人群有高达40％—80％致死率。因此预防和检测克罗诺杆菌至关重要。

克罗诺杆菌隶属于肠杆菌科，为能运动、周生鞭毛、兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌为条件性致病菌，对营养要求不高，基础的肉汤培养基即可满足生长繁殖的需要。克罗诺杆菌属的α-葡萄糖苷酶是区别于肠杆菌科其他菌属的一个重要特征，可分解5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃葡萄糖苷特异性酶底物，呈现蓝绿色易于辨别。

目前，对克罗诺杆菌的检测方法主要有传统微生物学法以及新兴分子生物学法，如聚合酶链式扩增反应(PCR)和等温扩增技术等。传统的微生物学方法耗时长且检测效率低，无法满足对于致病菌快速、方便、高通量以及高灵敏度检测的要求，因此迫切需要一种操作简单、快速的检测技术。新兴的分子技术由于扩增的核酸可能来自死亡细胞，可能会造成结果不准确等问题。其中一些检测方法还存在着仪器昂贵，需要专业技术人员操作等问题。大多数基于开发克罗诺杆菌特异性免疫传感器的研究都是使用自己研制的抗体，但制备过程非常复杂和困难，目前还没有针对这种细菌的商业抗体。因此，迫切需要一种更简单、经济、快速检测的活菌检测分析系统。

微流体纸基分析装置由于其价格便宜、便携、易于检测等优点为发展中国家或资源匮乏地区提供了一种很好的替代技术，将会是未来快速检测小型化、便携化的必然趋势。目前对于在纸基装置上对细菌的特异性检测研究较少，还没有利用该原理在纸基上检测克罗诺杆菌的报道。

发明内容

为了解决利用传统微生物学方法以及分子生物学方法检测克罗诺杆菌中存在的问题，本发明提供了一种更简单、经济、快速地检测克罗诺杆菌的纸基检测装置，所述纸基检测装置以Whatman No.1滤纸作为纸基材料，通过PVC胶板处理及5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-葡萄糖苷溶液的修饰获得。

在本发明的一个实施例中，所述PVC胶板处理Whatman No.1滤纸的方法为：

S1、将PVC胶板切割成若干个边长为1cm×1cm的方形底板；

S2、将Whatman No.1滤纸用圆形打孔器进行打孔，打孔下来的圆形滤纸留存备用；

S3、用同样孔径尺寸的圆形打孔器在切割后的底板区域中心进行手动打孔；

S4、将一张同样形状大小的未打孔的PVC胶板作为底板，揭去底板和S3获得的打过孔的PVC胶板涂有黏胶的一侧保护薄膜，压紧对贴粘合，把S2获得的同孔径的滤纸放置在暴露的带有黏胶的孔中，用力压制使三者充分粘合，装置制作完成。

进一步地限定，所述打孔器的孔径为4mm-8mm。