[发明专利]抗体融合蛋白及其应用

说明书

本发明涉及药物领域，尤其涉及抗体融合蛋白及其应用。该抗体融合蛋白表达量高，哺乳动物细胞293E中瞬时转染表达量100‑150mg/L；装配率高，正确装配率超过95％；亲和力高，单边抗体/融合蛋白和抗原结合KD值与阳性对照单克隆抗体/融合蛋白和抗原结合KD值相当；同时具有后续便于纯化的优点，使用Protein A或Protein L一步纯化纯度即可达到95％以上。药效学实验证明，该抗体融合蛋白具有良好的细胞学活性和体内药效活性，效果显著优于对照上市药物。

技术领域

本发明涉及药物领域，尤其涉及抗体融合蛋白及其应用。

背景技术

血管内皮生长因子(VEGF)蛋白质及其受体(VEGFR)在血管发生(从早期分化的内皮细胞发育胚胎脉管系统)、血管生成(从已有的血管形成新血管的过程)和淋巴管生成(形成新淋巴管的过程)中起重要作用。血小板源性生长因子(PDGF)蛋白质及其受体(PDGFR)参与调节几种细胞类型的细胞增殖、存活和迁移。

内皮细胞调节系统的功能障碍是癌症和与异常的血管发生、血管生成和淋巴管生成有关的各种疾病的关键特征。血管生成发生在胚胎发育和正常组织的生长、修复和再生、女性生殖周期、妊娠的建立和维持、伤口和骨折的修复中。除了发生在健康个体中的血管生成，血管生成事件还参与许多病理过程，尤其是肿瘤生长和转移，以及其中血管增生(尤其是微血管系统的血管增生)增加的其它病状，诸如糖尿病性视网膜病变、牛皮癣和关节病。抑制血管生成可用于预防或减轻这些病理过程或减缓它们的进展。

新生血管性眼科疾病的病因复杂，机制尚不完全明确。Anti-VEGF类药物在临床治疗中取得了显著疗效，已取代激光光凝(PDT)成为一线疗法。国际原研的雷珠单抗、艾力雅均已获CFDA批准在国内上市，成都康弘药业的康柏西普也于2013年上市，这3种药物可使约半数以上的初治病人视力获得显著的改善，但仍存在约15％的病人根本不应答和约15％～20％的病人在anti-VEGF治疗后出现脱敏、疗效丧失脱敏。研究发现，VEGF-A被中和后VEGF-C的代偿性增加，是导致wAMD病人anti-VEGF治疗脱敏的重要因素。

双特异性抗体(bispecific monoclonal antibody,BsAb)是一种人工制作出来的可以同时结合两种不同抗原的特殊抗体。双特异性抗体在自然状态下不存在，只能通过人工制备。本领域中双或多特异性抗体能够结合2种以上抗原，可以利用细胞融合、化学缀合或重组DNA技术产生。最近己经开发了广泛多样的重组双特异性抗体形式，例如通过融合例如IgG抗体形式和单链结构域的四价双特异性抗体(参见例如Co1oma,M.J.,等,NatureBiotech.15(1997)159-163；WO2001077342；和Morrison,S.L.,Nature Biotech.25(2007)1233-1234)。此外，还开发了能够结合2种以上抗原的诸多其他新型形式，其中抗体中心结构(IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)不再保持如双抗体、三链抗体或四链抗体、minibodies和若干单链形式(scFv、Bis-scFv)(Holliger,P.,等，Nature Biotech.23(2005)1126-1136；Fischer，N.，和Léger，O.，Pathobio1ogy74(2007)3-14；Shen,J.，等，Journa1 ofImmunogica1 Methods 318(2007)65-74；Wu,C.，等.,Nature Biotech.25(2007)1290-1297)。

然而，现有技术报道的双特异性抗体蛋白的表达量较低、亲和力和装配率也不理想。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种抗体融合蛋白及其应用，该抗体融合蛋白表达量高、装配率高和亲和力均较高，同时具有后续便于纯化的优点，使用ProteinA或ProteinL一步纯化纯度即可达到95％以上。

本发明提供的抗体融合蛋白，包括：

a)特异性结合VEGFC的抗体；