[发明专利]一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法在审
| 申请号： | 202110224317.3 | 申请日： | 2021-03-01 |
| 公开（公告）号： | CN112778415A | 公开（公告）日： | 2021-05-11 |
| 发明（设计）人： | 王晗;王丽君;郭荷椰;王际辉;赵清雅 | 申请（专利权）人： | 大连工业大学 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C07K16/06;C07K14/435;C07K1/22;C12N15/12;C12N15/70 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 王灿 |
| 地址： | 116034 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 刺参 ajcytb 克隆 抗体 制备 方法 | ||
1.一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)将仿刺参AjCYTB基因中跨膜区域对应的序列删除，拼接剩余的非跨膜区域序列，得到拼接后的AjCYTB基因序列；
(2)对拼接后的AjCYTB基因序列进行密码子优化，得到的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示；
(3)用密码子优化后的AjCYTB基因序列构建AjCYTB表达载体；
(4)将AjCYTB表达载体转化到感受态细胞中，依次经过扩大培养、诱导表达、菌体收集、菌体破碎、蛋白纯化，得到AjCYTB蛋白；
(5)用AjCYTB蛋白对动物进行两次免疫，得到仿刺参AjCYTB多克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述表达载体为pCold II，所述感受态细胞为大肠杆菌BL21感受态菌体。
3.根据权利要求2所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述蛋白纯化过程中利用His标签蛋白纯化试剂盒进行蛋白纯化。
4.根据权利要求3所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述动物为6～8周的昆明鼠。
5.根据权利要求4所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述两次免疫的过程中第一次免疫时每只昆明鼠免疫量为AjCYTB蛋白15～25μg，第二次免疫在第一次免疫后的第21天进行，每只昆明鼠免疫量为AjCYTB蛋白15～25μg。
6.根据权利要求5所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述两次免疫后收集血清，所述仿刺参AjCYTB多克隆抗体存在于血清中。
7.根据权利要求6所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述收集血清在第一次免疫后的第35天进行。
8.根据权利要求1～7任意一项所述的一种仿刺参AjCYTB多克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述仿刺参AjCYTB多克隆抗体的效价为1：50000。
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