[发明专利]A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统及其应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统及其应用。所述递药系统由A549细胞来源外泌体与连翘酯苷A溶液混合后，经超声、恒温培养恢复、离心、洗涤重悬、再次离心、重悬制得；混合溶液中，连翘酯苷A的浓度为200‑800μg/mL；以蛋白量计，A549细胞来源外泌体的浓度为400‑420μg/mL。本发明的A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统性质稳定优越，显著提高FTA的生物利用度，并具有更好的抗肿瘤细胞转移作用。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统及其应用。

背景技术

连翘是中医临床常用药物，归肺、心、小肠经，善清心火，散上焦之热，被称为“疮家圣药”，临床资料显示连翘为治疗肺系病的最常用清热解毒类药物，而清热解毒的功效被认为与抗癌特性有关。连翘酯苷A(Forsythiaside A,FTA)是连翘的主要有效成分之一，常作为评价连翘质量的指标性成分^[4]，是一种苯乙醇苷类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗癌抗病毒、抗菌以及神经保护等广泛的药理活性，尤其在抗炎和抗氧化的药理活性上表现突出。但FTA在体内吸收差，渗透率差，且消除快，代谢产物复杂，导致生物利用度过低。

外泌体是由多种类型细胞分泌的纳米级脂质双分子层包裹的细胞外囊泡。与脂质体等其他药物载体相比，具有生物相容性高、稳定性好、低免疫原性等特点。且外泌体还扮演着细胞间的通讯信使，对靶细胞具有天然的亲和力，因此作为药物载体的外泌体引起了越来越多的关注。但目前尚未见使用A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A进行抗肿瘤的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统及其应用。

本发明提供的A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统，所述递药系统由A549细胞来源外泌体与连翘酯苷A溶液混合后，经超声、恒温培养恢复、离心、洗涤重悬、再次离心、重悬制得；混合溶液中，连翘酯苷A的浓度为200-800μg/mL，以蛋白量计，A549细胞来源外泌体的浓度为400-420μg/mL。

进一步的，所述A549细胞来源外泌体由以下步骤制得：

S1、A549细胞在37℃，5％CO₂条件下，采用含体积分数10％胎牛血清的RPMI 1640完全培养基培养，待细胞生长密度达到90％-92％，以含体积分数1％血清的培养基继续培养24-25h后，收集上清液；

S2、将细胞上清液4℃、100×g离心10-12min，然后4℃、2000×g离心15-20min，浓缩上清液，4℃、15000×g离心30-35min，上清液用0.22μm滤膜过滤，最后4℃、120 000×g离心滤液70-75min，PBS重悬沉淀，4℃、120 000×g再次离心65-70min，得到的沉淀即A549细胞来源外泌体。

进一步的，超声条件为：20％振幅，5s开，5s关，1min循环，共循环6次，循环间隔2min。

进一步的，恒温培养恢复条件为：37℃、1h。

进一步的，离心条件为：4℃、120 000×g、70min。

本发明提供的所述的A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统在制备抗肿瘤药物中的应用。进一步的，所述的A549细胞来源外泌体装载连翘酯苷A递药系统在制备抗肿瘤迁移的药物中应用。更进一步的，所述肿瘤细胞为人肺上皮腺癌细胞。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：