[发明专利]一种特异性杀伤肿瘤细胞的免疫细胞制剂及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种特异性杀伤肿瘤细胞的免疫细胞制剂及其制备方法和应用，通过DC细胞呈递癌睾丸抗原的多组抗原肽段，制备了针对特异性肿瘤细胞系杀伤的DC‑CTL细胞制剂，以达到自体免疫细胞特异性杀伤肿瘤的目的，所述制备方法流程简单，无需使用传统的免疫磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分选出CD8+T细胞，且制备得到的DC‑CTL混合细胞制剂纯度高、安全性高、活性高、数量多、能够达到临床级的CTL细胞量，对肿瘤细胞的杀伤特异性强，具有良好的临床应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体而言，涉及一种特异性杀伤肿瘤细胞的免疫细胞制剂及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，我国恶性肿瘤的发病率逐年增高，并且大多数患者预后较差，严重危害人类的健康和生活质量(Liang W,Guan W,Chen R,et al.Cancer patients in SARS-CoV-2infection:a nationwide analysis in China[J].The lancet oncology,2020,21(3):335-337.)。目前，手术治疗、放疗、化疗作为针对肿瘤的三大常规治疗方法，远远不能改变肿瘤治疗的现状。随着分子生物学技术的发展、免疫学理论的不断丰富，肿瘤的免疫疗法逐渐兴起，过继性细胞免疫疗法(Adoptive cell immunotherapy，ACI)已经成为继手术治疗、放疗、化疗后肿瘤的另一种有效治疗手段。过继性细胞免疫疗法是指从肿瘤患者体内分离免疫活性细胞，在体外进行扩增和功能鉴定，然后向患者回输，从而达到直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀伤肿瘤细胞的目的。

过继性免疫治疗的关键在于筛选具有肿瘤特异性杀伤作用的效应细胞，对靶细胞即肿瘤细胞产生致命的杀伤，以实现过继性免疫治疗高效低毒的特点。抗原特异性的细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)由于其具有杀瘤谱广、杀瘤活性高、增殖能力强等特点，已成为过继性免疫治疗中常用的效应细胞，如何提高CTL细胞数量及活性、增强其抗肿瘤特异性是提高过继性免疫治疗效果的关键。树突状细胞(Dendritic cells，DC)是迄今为止发现的效力最强的抗原递呈细胞，具有高效摄取、加工、递呈肿瘤相关抗原，并激活初始免疫反应的独特功能，在免疫反应的诱导和调控中发挥重要作用，DC能够显著刺激初始T细胞增殖，是机体适应性T细胞免疫应答的启动者。

目前，DC-CTL制备技术存在的缺陷包括：(1)自体肿瘤组织来源的全肿瘤抗原成分众多，可能引发自身免疫反应，存在安全风险；(2)使用人工合成的单一肿瘤抗原多肽负载DC制备得到的DC-CTL治疗效果有限，只能有效杀伤表达该单一肿瘤抗原的肿瘤细胞；(3)制备流程复杂，需用传统的免疫磁珠分离技术分选出CD8+T细胞，磁性微珠难以完全洗脱而成为了非细胞杂质，对目的细胞的后续培养存在一定的影响，扩增时间长等；(4)现有的细胞因子组合培养扩增的CTL数量不足，细胞活性不高，难以满足临床需求。

本发明针对上述缺陷，通过DC细胞呈递癌睾丸抗原的多组抗原肽段，制备了针对特异性肿瘤细胞系杀伤的DC-CTL混合细胞制剂，以达到自体免疫细胞特异性杀伤肿瘤的目的，所述制备方法流程简单，无需使用传统的免疫磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分选出CD8+T细胞，且制备得到的DC-CTL混合细胞制剂纯度高、安全性高、活性高、数量多、能够达到临床级的CTL细胞量，对肿瘤细胞的杀伤特异性强，具有良好的临床应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性杀伤肿瘤细胞的免疫细胞制剂及其制备方法和应用，所述制备流程简单，无需使用传统的免疫磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分选出CD8+T细胞，制备得到的DC-CTL混合细胞纯度高、数量多、能够达到临床级的CTL细胞量，对肿瘤细胞的杀伤特异性强。

本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：

本发明的第一方面提供了一种特异性杀伤肿瘤细胞的免疫细胞制剂的制备方法。

进一步，所述方法包括如下步骤：