[发明专利]一种快速、同时检测食品中大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的方法

权利要求书

1.一种快速、同时检测食品中大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的方法，其特征在于，以待检测食品样本为模板直接进行扩增，利用ddPCR同时检测食品中的大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌；

待检测食品样本中菌液浓度换算公式为cfu/mL=copies/μL×20μL/加样量×1000μL；

所述ddPCR中的扩增体系为：

试剂 体积 浓度

2×ddPCR Supermix for Probes 10.4μL

上游引物 1μL 10μM

下游引物 1μL 10μM

引物探针 0.5μL 10μM

样品模板 2μL

PCR级去离子水 补足体系至20μL；

对目标菌为大肠杆菌O157:H7的引物对为：

上游引物：5’ -GCACTAAAAGCTTGGAGCAGTTC-3’；

下游引物：5’ -AACAATGGGTCAGCGGTAAGGCTA-3’；

FAM通道探针：5’ -FAM-CGTTGGCGAGGACC-BHQ1-3’；

VIC通道探针：5’ -VIC-CGTTGGCGAGGACC-BHQ1-3’；

对目标菌为鼠伤寒沙门氏菌的引物对为：

上游引物：5’ -GCTTTCTCTACTTAACAGTGCTC-3’；

下游引物：5’ -CAGTGCGATCAGGAAATCAAC-3’；

FAM通道探针：

5’ -FAM-CCTGAATTACTGATTCTGGTACTAATGGTGATG-BHQ1-3’；

VIC通道探针：

5’ -VIC-CCTGAATTACTGATTCTGGTACTAATGGTGATG-BHQ1-3’；

所述食品包括苹果汁、牛奶和鸡肉。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ddPCR的反应程序为：

（1）微滴生成：通过微滴发生器进行滴化处理，生成微滴；

（2）PCR扩增程序为：预变性10 min,95℃；95℃20s变性，60℃25s退火,72℃60s延伸，40个循环；98℃10 min热失活；4℃保存。