[发明专利]高GC含量的核酸引物的后处理方法有效
| 申请号： | 202110231340.5 | 申请日： | 2021-03-02 |
| 公开（公告）号： | CN113004342B | 公开（公告）日： | 2022-12-23 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵;刘宗文;沈成祥 | 申请（专利权）人： | 通用生物（安徽）股份有限公司 |
| 主分类号： | C07H1/00 | 分类号： | C07H1/00;C07H21/04 |
| 代理公司： | 合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙) 34160 | 代理人： | 刘生昕 |
| 地址： | 239000 安徽省滁*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | gc 含量 核酸 引物 处理 方法 | ||
1.高GC含量的核酸引物的后处理方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：氨解前处理；
步骤二、氨解；
步骤三、清洗；
步骤四、洗脱；
氨解前处理的具体步骤如下：
S21、将装有核酸引物的合成板装置(1)配平后放入离心机离心，在转速为2600r/min的条件下高速离心5s；
S22、往合成板装置(1)的每孔内加入140μL的二乙胺、乙腈混合液，静置5min后负压抽干，配平高速离心，在转速为3200r/min的条件下离心1min,重复2次；
S23、再往合成板装置(1)的每孔内加入200μL清洗乙腈，静置10s后负压抽干，配平高速离心，在转速为3200r/min的条件下离心1min，重复4次；
所述氨解的具体步骤如下：
S31、切割：在合成板装置(1)底部放置一块新的96微孔板(2)，往合成板装置(1)的每孔内加入40μL氨解液，通过氨解盒夹具(3)放于氨解盒(4)中，在温度为40℃的条件下氨解1小时；
S32、脱保护：配平，在转速为2400r/min的条件下高速离心1min后弃去合成板装置(1)，保留底部96微孔板(2)，并在96微孔板(2)的基础上，加入50μL氨解液，通过氨解盒夹具(3)放于氨解盒(4)中，在温度为90℃的条件下氨解1小时；
所述清洗的具体步骤如下：
S41、在抽滤装置上放入合成板装置(1)，往合成板装置(1)的每孔内加入200μL乙腈溶剂静置5s后负压抽干，重复2次；
S42、配平，在转速为2400r/min的条件下高速离心1min；
所述洗脱的具体步骤如下：
往合成板装置(1)的每孔内加入150μL的3wt％三乙胺溶剂，静置30s后，在转速为300r/min的条件下离心1min，之后在转速为600r/min的条件下离心1min，之后在转速为1000r/min的条件下离心30s，之后在转速为1500r/min的条件下离心30s，之后在转速为2000r/min的条件下离心30s，之后在转速为2400r/min的条件下离心30s。
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