[发明专利]一种利用HPLC法检测肉蛋类食品中类胡萝卜素的方法

说明书

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种利用高效液相色谱法检测肉蛋食品中类胡萝卜素的方法。本发明提供利用HPLC法检测肉蛋类食品中类胡萝卜素的方法，采用C18色谱柱，以乙腈为流动相A、二氯甲烷为流动相B进行梯度洗脱，样品进入检测器检测；所述类胡萝卜素包括虾青素、叶黄素、斑蝥黄、玉米黄素或β‑胡萝卜素中的一种或多种。本发明的方法具有定量准确、操作简便、省时省力的优点。

技术领域

.本发明属于分析化学领域，具体涉及一种利用高效液相色谱法检测肉蛋食品中类胡萝卜素的方法。

背景技术

.鸡蛋、鸡肉长期以来作为国民膳食里优质蛋白质的来源，尤其适合病人补充营养、提高免疫力。我国民间一直深信土鸡蛋比一般鸡蛋具有更高的营养价值，且纯天然无污染，因此价格更高。目前主要是靠蛋黄颜色分辨土鸡蛋和普通鸡蛋，商家普遍宣传土鸡蛋的蛋黄颜色比普通鸡蛋更黄，于是就有不法商人通过超量使用斑蝥黄、叶黄素等饲料添加剂饲喂普通蛋鸡，人为加深鸡蛋蛋黄色泽，再打着土鸡蛋的名义高价售卖。

.斑蝥黄(Canthaxanthin，C₄OH₅₂O₂)又称角黄素，属于类胡萝卜素(Carotenoids)家族，可通过家禽消化道吸收并最终富集于蛋黄，是一种较为常用的饲料添加剂。除此之外，叶黄素、玉米黄素、虾青素、β-胡萝卜素等都属于类胡萝卜素，广泛用于食品、医药、化妆品、饲料等行业。类胡萝卜素是一类天然色素的总称，是含40个碳的类异戊烯聚合物,即四萜化合物。迄今，被发现的天然类胡萝卜素已达700多种，根据化学结构的不同可以将其分为两类，一类是胡萝卜素(只含碳氢两种元素,不含氧元素,如β-胡萝卜素和番茄红素)，另一类是叶黄素(有羟基、酮基、羧基、甲氧基等含氧官能团，如叶黄素和虾青素)。添加这些色素能提高肉鸡皮肤、脚胫和胴体的颜色，使鸡肉的新鲜度看起来提高，以此来增加鸡肉制品的附加值，但这些色素的过量添加却会对人体造成一定危害。如斑蝥黄积累会造成视力减退等眼疾，所以欧盟于2003年规定饲料中斑蝥黄的含量为25mg/kg，联合国粮食及农业组织和世界卫生组织联合食品添加剂专家委员会规定斑蝥黄每日允许摄入量为0.03mg/kg BW(body weight)，日本“肯定列表制度”规定禽蛋中斑蝥黄的最大残留限量为0.1mg/kg，我国也在2018年《饲料添加剂安全使用规范》中规定饲料中斑蝥黄的限量为25mg/kg。

.目前针对天然色素的检测方法主要包括分光光度法，高效液相色谱法，液相色谱-质谱联用法等。其中，紫外分光光度法灵敏度较低；液相色谱-质谱联用法灵敏度较高、分析速度快，但是使用成本较高，普适性较低，难以大范围应用；高效液相色谱法分析速度快，普及率高，成为分离此类物质的首选方法。但是玉米黄质和叶黄素两者互为异构体，分离起来比较困难，目前利用高效液相色谱法对其分离仍然是一项挑战。

.国家针对以上色素制定了相应的检测方法标准，分析检测主要采用高效液相色谱法，如《河豚鱼、鳗鱼和烤鳗中角黄素残留量的测定液相色谱-紫外检测法》(GB/T 22958-2008)、《饲料中斑蝥黄的测定高效液相色谱法》(NY/T 2896-2016)。但这些标准都是以饲料或其他肉类为基质，且基本只针对一种着色剂进行检测，目前并没有针对禽蛋中多种着色剂的检测标准。

.申请号为CN201810342366.5，名称为“液相色谱法检测果实中类胡萝卜素的流动相配方及果实中类胡萝卜素检测的HPLC方法”的发明专利，提供了一种检测果实中多种类胡萝卜素的液相色谱方法。该方法通过调节流动相成分的比例，可以分离出水果果实中的番茄红素、β-胡萝卜素、六氢番茄红素、八氢番茄红素、叶黄素，但不能用于分离斑蝥黄、虾青素等色素，也不适用于肉蛋类食品的检测。可见，现有的技术方法对于分离复杂肉蛋基质中的多种类胡萝卜素还存在很大的局限。

.综上所述，本发明提供一种利用HPLC法分离肉蛋类食品中多种类胡萝卜素的方法，可以补充现有检测方法不不足。

发明内容

.有鉴于此，本发明的目的在于提供一种利用HPLC法检测肉蛋类食品中类胡萝卜素的方法，具体技术方案如下：