[发明专利]用于检测诺如病毒GI型和GII型恒温扩增的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的用于检测诺如病毒GI型和GII型恒温扩增的荧光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤S1、从样品中提取RNA；

步骤S2、对所述RNA进行恒温扩增；其中，在反应体系中，采用用于检测诺如病毒GI型和GII型恒温扩增的引物组，所述引物组包括诺如病毒GI型引物组和诺如病毒GII型引物组；其中，所述诺如病毒GI型引物组包括SEQ ID NO.1所示的外引物GI-OF、SEQ ID NO.2所示的外引物GI-OB、SEQ ID NO.3所示的内引物GI-IF、SEQ ID NO.4所示的内引物GI-IB、SEQ IDNO.5所示的环引物GI-LF和SEQ ID NO.6所示的环引物GI-LB；所述诺如病毒GII型引物组包括SEQ ID NO.7所示的外引物GII-OF、SEQ ID NO.8所示的外引物GII-OB、SEQ ID NO.9所示的内引物GII-IF、SEQ ID NO.10所示的内引物GII-IB、SEQ ID NO.11所示的环引物GII-LF和SEQ ID NO.12所示的环引物GII-LB；

步骤S3、结果判定：

若有“S”型荧光信号扩增曲线，Ct值35，则判断为阳性；

若无“S”型荧光信号扩增曲线，无Ct值或Ct值45则判断为阴性；

若Ct值在35-45之间，重复实验，若Ct值45，荧光信号扩增曲线有明显起峰，该样本判断为阳性，否则为阴性；

在步骤S2中，所述恒温扩增的反应体系体积为25μL，其中，所述反应体系中包括以下终浓度的反应混合物：1×RNA恒温扩增反应缓冲液、2×SYBR Green I、0.32U/μL Bst DNA聚合酶、0.04U/μL AMV逆转录酶、0.2μM外引物OF、0.2μM外引物OB、1.6μM内引物IF、1.6μM内引物IB、0.8μM环引物LF和0.8μM环引物LB。

2.根据权利要求1所述的荧光检测方法，其特征在于，在步骤S2中，所述恒温扩增的反应体系总体积为25μL，其中，所述反应体系中包括2×RNA恒温扩增反应缓冲液12.5μL、100×SYBR Green I 0.5μL、8U/μL Bst DNA聚合酶1μL、5U/μL AMV逆转录酶0.2μL、引物组1μL、样品RNA模板2.0μL、其余为去核酸的超纯水补足25μL。

3.根据权利要求2所述的荧光检测方法，其特征在于，所述引物组1μL包括5μM外引物OF、5μM外引物OB、40μM内引物IF、40μM内引物IB、20μM环引物LF和20μM环引物LB。