[发明专利]用于除皱的细胞制剂及其制备方法

权利要求书

1.用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，方法步骤如下：

S1：干细胞的制备；

S2：皮肤成纤维细胞的制备；

S3：将S1制备的干细胞与S2制备的皮肤成纤维细胞按细胞数比1:5-15比例混合，用无酚红的DMEM培养基配成注射液，用于面部除皱。

2.根据权利要求1所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S1中干细胞制备的方法步骤如下：

S11：将分娩时得到的胎盘用含有抗生素的生理盐水进行清洗，并剪取母胎交接面底蜕膜部位组织；

S12：将S11中剪取的组织用含有抗生素的生理盐水漂洗干净后剪碎，加入含胰酶浓度0.1％的D-Hank's液10mL消化；

S13：向S12的消化混合液中加入含10％胎牛血清的DMEM培养基终止消化；

S14：将终止消化后的混合液离心，弃去上清液，并用含10％胎牛血清的DMEM培养基重悬细胞，放入培养箱培养，并将培养完成的干细胞冻存。

3.根据权利要求2所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S12中消化的温度为37℃，时间4-6h。

4.根据权利要求2所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S13中离心时间8-12min，转速1200-1800rpm。

5.根据权利要求1所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S2中皮肤成纤维细胞制备的方法步骤如下：

S21：切取一块人自体脸颊或耳后皮肤组织，将组织在无菌环境下完全浸泡于组织处理液中10-20min，将浸泡后的组织去除脂肪组织及结缔组织，剩余组织置于无菌培养皿中剪碎；

S22：将剪碎后的组织加入37℃预热的含Hank’s平衡盐溶液的混合酶消化液进行消化，消化结束后加入终止消化液以终止消化；

S23：将所得组织液合并至离心管中，离心，去除上清，向细胞沉淀加入细胞培养液，重悬至3-15ml作为原代细胞，后转移至培养皿培养，得到P₀成纤维细胞；

S24：将P₀代细胞接种至培养瓶中，培养结束后收集细胞，得到P1代成纤维细胞，取样并计数细胞的数量和活率。

6.根据权利要求5所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S22中复合酶包含如下重量份原料：dispase酶0.1-5份、DNA酶0.2-2份、胶原酶Ⅱ0.1-3份、胶原酶Ⅳ0.1-3份、透明质酸酶0.1-3份。

7.根据权利要求5所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S23中离心的条件为：时间3-5min、转速1200-1800rpm。

8.根据权利要求5所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S23中培养的条件为：温度37℃、5％CO₂培养箱中培养。

9.根据权利要求5所述的用于除皱的细胞制剂的制备方法，其特征在于，所述S23中细胞培养液为包含B-27、bFGF和EGF的DMEM/F12培养基；所述B-27、bFGF和EGF的质量比为0.3-0.7:1:1-1.5。

10.一种如权利要求1-9任一项所述方法制备的用于除皱的细胞制剂。