[发明专利]用于除皱的细胞制剂及其制备方法

说明书

本发明公开了用于除皱的细胞制剂及其制备方法，具体方法步骤如下：S1：干细胞的制备；S2：皮肤成纤维细胞的制备；S3：将干细胞与皮肤成纤维细胞混合，用无酚红的DMEM培养基配成注射液，用于面部除皱；其中干细胞制备的方法步骤如下：S11：将分娩时得到的胎盘进行清洗，并剪取母胎交接面底蜕膜部位组织；S12：将S11中剪取的组织用含有抗生素的生理盐水漂洗干净后剪碎，加入含胰酶浓度0.1％的D‑Hank's液10mL消化；S13：向S12的消化混合液终止消化；S14：将终止消化后的混合液离心，弃去上清液，放入培养箱培养，并将培养完成的干细胞冻存。本发明采用上述干细胞与皮肤成纤维细胞配伍，可用于人体表皮皱纹消除及凹陷填充，效果明显，自然持久，无严重副作用。

技术领域

本发明涉及细胞制剂技术领域，尤其涉及用于除皱的细胞制剂及其制备方法。

背景技术

目前除皱的办法有多种，局部外用的化妆品效果不明显、玻尿酸等医用注射物填充效果短暂。近年来，皮肤成纤维细胞注射除皱技术在美容医学界取得极大的成功。该技术优点在于使皮肤真皮层的厚度和密度增加，舒展皱纹，填平凹陷，恢复皮肤的弹性和光泽，形态自然，效果长久。但该技术所用的皮肤成纤维细胞为成体细胞，在培养过程中容易老化，导致治疗效果不佳。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了用于除皱的细胞制剂及其制备方法，该细胞制剂具有提高真皮层细胞厚度、改善局部细胞活力、修复表皮损伤细胞、去除皱纹色斑、作用长久等功效。

本发明提出的用于除皱的细胞制剂的制备方法，方法步骤如下：

S1：干细胞的制备；

S2：皮肤成纤维细胞的制备；

S3：将S1制备的干细胞与S2制备的皮肤成纤维细胞按细胞数比1:5-15比例混合，用无酚红的DMEM培养基配成注射液，用于面部除皱。

优选地，所述S1中干细胞制备的方法步骤如下：

S11：将分娩时得到的胎盘用含有抗生素的生理盐水进行清洗，并剪取母胎交接面底蜕膜部位组织；

S12：将S11中剪取的组织用含有抗生素的生理盐水漂洗干净后剪碎，加入含胰酶浓度0.1％的D-Hank's液10mL消化；

S13：向S12的消化混合液中加入含10％胎牛血清的DMEM培养基终止消化；

S14：将终止消化后的混合液离心，弃去上清液，并用含10％胎牛血清的 DMEM培养基重悬细胞，放入培养箱培养，并将培养完成的干细胞冻存。

优选地，所述S12中消化的温度为37℃，时间4-6h。

优选地，所述S13中离心时间8-12min，转速1200-1800rpm。

优选地，所述S2中皮肤成纤维细胞制备的方法步骤如下：

S21：切取一块人自体脸颊或耳后皮肤组织，将组织在无菌环境下完全浸泡于组织处理液中10-20min，将浸泡后的组织去除脂肪组织及结缔组织，剩余组织置于无菌培养皿中剪碎；

S22：将剪碎后的组织加入37℃预热的含Hank’s平衡盐溶液的混合酶消化液进行消化，消化结束后加入终止消化液以终止消化；

S23：将所得组织液合并至离心管中，离心，去除上清，向细胞沉淀加入细胞培养液，重悬至3-15ml作为原代细胞，后转移至培养皿培养，得到P₀成纤维细胞；

S24：将P₀代细胞接种至培养瓶中，培养结束后收集细胞，得到P1代成纤维细胞，取样并计数细胞的数量和活率。