[发明专利]一种狗头枣阿拉伯半乳聚糖的制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种狗头枣阿拉伯半乳聚糖(SJP‑1b)的制备方法和应用。该方法是先运用乙醇(30％、50％、70％和80％(v/v))分级沉淀将狗头枣粗多糖进行分离纯化，相应得到四个多糖组分，将含有半乳糖醛酸的SJP‑1组分的多糖再次运用乙醇(10％和20％(v/v))分级沉淀得到了得率较高的阿拉伯半乳聚糖SJP‑1b。该阿拉伯半乳聚糖SJP‑1b的相对摩尔比为Ara:Gal＝3.06:1，得率更高且为0.54％，具有较高的免疫调节活性。本发明通过两次分级沉淀，得到了更加全面、细分的多糖组分，整体操作步骤简单，耗时短，得率高，得到的阿拉伯半乳聚糖组分纯度高，适用于大规模生产。

技术领域

本发明属于糖生物学技术领域，具体涉及一种狗头枣多糖组分的制备方法和应用。

背景技术

多糖是由十个以上的单糖通过糖苷键结合而成的天然生物大分子，广泛参与细胞的各项生命活动，如细胞识别、生长、分化、机体代谢、胚胎发育、免疫应答等^[1]。多糖具有抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等多种生物活性，且无毒副作用，成为天然药物及保健品研发的重要组成部分^[2-4]。

多糖的活性与结构密切相关^[5]，多糖结构受分离纯化方法的影响，因此多糖的分离纯化方法至关重要^[6]。传统的多糖分离方法主要是通过阴离子交换柱层析结合分子筛柱层析进行分离纯化，即通过水浸提样品，收集并浓缩上清液，加入乙醇，收集沉淀，得到粗多糖；然后将水提醇沉得到的粗多糖经离子交换柱层析及分子筛柱层析对多糖样品进行分离纯化。这种分离纯化方法操作复杂、耗时长、产率低，并会造成部分糖组分丢失。此外，多糖的分离纯化方法还包括乙醇分级沉淀法，即取粗多糖配制成一定浓度的水溶液，缓慢加入乙醇至终浓度为30％，进行第一级醇沉，收集得到30％醇沉的多糖组分；再取上清液，加入继续补加无水乙醇至终浓度50％，进行第二级淀，收集得到50％醇沉的多糖组分；再取上清液，加入无水乙醇……如此依次可继续获得30％、50％、70％醇沉的多糖组分等，并对这些多糖组分进行理化性质测定和活性研究。目前该方法已用于分离纯化枸杞子粗多糖、黄芪多糖等^[5,7]，其中枸杞子多糖经乙醇分级沉淀纯化得到的阿拉伯半乳聚糖具有强的免疫调节作用。

红枣，又名大枣，枣属，属于鼠李科。红枣主要分布在中国西北地区、黄河流域和东部地区，是传统药食两用植物。研究显示，红枣中含有许多丰富的化学成分，包括多糖、黄酮、三萜酸、氨基酸、多酚和维生素C等，其中多糖是红枣中主要的活性成分之一。据报道红枣多糖具有免疫调节^[8]、抗氧化^[9]、抗肿瘤^[10]、降血糖^[11]、保肝^[12]、保护胃肠道^[13]等生物活性。狗头枣作为一种重要的红枣品种，产于“红枣之乡”一带，是陕西省的一个重大产业，狗头枣含有丰富的多糖类物质而被广泛用作各种食品和保健品开发的原材料，在食品保健、生物医药等方面有很高的应用价值。

目前对于红枣多糖的研究主要集中于木枣、金丝小枣和新疆红枣等品种。红枣多糖的分离纯化主要采用传统的柱层析法，Lin^[14]等人用碱提法得到红枣粗多糖，除蛋白脱色后经DEAE-Sepharose色谱柱和Sephacryl S-300凝胶层析法纯化红枣粗多糖，最终冻干得到纯化多糖SAZMP3，该多糖组分的分子量为9.73kDa，主链为1,4-α-D-GalA，支链为1,3-β-D-Galp,1,3,5-Araf,1,2,4-α-L-Rhap，支链末端连接着1-Araf,1-Rhap,1-Galp。Wang^[15]等人用超声波辅助提取得到红枣粗多糖，然后经DEAE-Sepharose离子交换色谱分离纯化得到HJP1组分，理化性质分析显示HJP1主要由鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成，分子量为6.76kDa。HJP1的主要结构为(1→5)-Araf,(1→3)-Rhap,(1→4)-Galp。