[发明专利]一种同时测定血浆中抗凝药物及活性代谢物浓度的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定血浆中抗凝药物及活性代谢物浓度的方法，抗凝药物分别为达比加群酯、利伐沙班、依度沙班和阿哌沙班，活性代谢物为达比加群。该方法的专属性、精密度、准确度、线性和稳定性等均符合生物样品的分析要求，灵敏度较高，可以用于临床达比加群酯、达比加群、利伐沙班、依度沙班和阿哌沙班的治疗药物监测。

技术领域

本发明涉及血浆药物浓度检测技术领域，尤其涉及一种同时测定血浆中抗凝药物和活性代谢物浓度的方法。

背景技术

达比加群(如图1.1中)是一种强极性的两性化合物，不溶于有机溶剂，达比加群酯(如图1.2中)是前药，在体内被转化为达比加群而发挥抗凝作用。达比加群酯是一种人工合成的新型口服抗凝抑制剂，它能可逆地竞争性抑制凝血酶活性，属于非肽类凝血酶抑制剂。其口服后通过消化道迅速吸收，在血浆和肝脏内通过酯酶水解可以产生活性代谢产物达比加群，通过抑制凝血酶发挥抗凝活性。利伐沙班(如图1.3中)和阿哌沙班(如图1.4中)均属于选择性Ⅹa因子抑制剂，它不需要抗凝血酶Ⅲ参与，可直接拮抗游离和结合的Ⅹa因子，临床用于择期髋关节或膝关节置换术的成年患者，以预防静脉血栓形成。依度沙班(如图1.5中)是达比加群、利伐沙班和阿哌沙班之后，第4个获得美国FDA批准的新型的口服抗凝药，是一种Ⅹa因子抑制剂，具有高度选择性，可直接抑制FXa，其结果可延长凝血酶原时间(prothrombin time，PT)和活化部分凝血活酶时间(Activated partial thrombophastintime，APTT)，最终抑制血栓形成。

专利CN111812219A提供了一种检测血浆中抗凝血药物浓度的方法，其中提供了检测达比加群、利伐沙班和阿哌沙班的检测方法，但是其没有公开同时检测达比加群酯、利伐沙班、依度沙班、阿哌沙班和达比加群的方法。此外，该专利中定量下限为1ng/mL，灵敏度低。

因此，提供一种灵敏度高，且可以同时检测血浆中达比加群酯、利伐沙班、依度沙班、阿哌沙班和达比加群的方法，是一个重要的研究方向，有助于临床上对此类药物进行监测。

发明内容

本发明为实现上述目的，提供了一种超高效液相色谱串联质谱法同时测定血浆中四种抗凝药物及一种活性代谢物的浓度的方法。

一种同时测定血浆中抗凝药物及活性代谢物浓度的方法，所述抗凝药物分别为达比加群酯、利伐沙班、依度沙班和阿哌沙班，所述活性代谢物为达比加群；采用超高效液相色谱串联质谱技术检测经过前处理的血浆中的抗凝药物及活性代谢物，通过超高效液相色谱将待测物与血浆基质分离，然后串联质谱进行同位素内标定量，以标准品峰面积与相应内标峰面积之比为Y轴，标准品浓度为X轴，绘制标准曲线，计算血浆中抗凝药物和活性代谢物的含量；

色谱条件如下

固定相：色谱柱型号Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18(3.5μm,2.1×100mm)；

流动相：A相：0.01-0.2％的甲酸水溶液，B相：0.01-0.2％的甲酸乙腈溶液；采用流动相A和流动相B不同体积混合，进行梯度洗脱；

质谱条件如下：

在电喷雾电离检测模式下，采用多反应监测，正离子模式；毛细管电压4500V；离子源温度550℃；第一离子源气体，55psi；第二离子源气体，55psi；气帘气，35psi。

优选地，流动相：A相：0.1％的甲酸水溶液，B相：0.1％的甲酸乙腈溶液；柱温：40℃；流速：0.3mL/min；进样量：2μL。