[发明专利]一种检测蜜蜂急性麻痹病毒的引物组和探针与应用及其检测方法在审
| 申请号： | 202110241403.5 | 申请日： | 2021-03-04 |
| 公开（公告）号： | CN112853003A | 公开（公告）日： | 2021-05-28 |
| 发明（设计）人： | 张体银;李丹丹;王武军;田国宁;张志灯;于师宇 | 申请（专利权）人： | 福州海关技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京睿智保诚专利代理事务所(普通合伙) 11732 | 代理人： | 周新楣 |
| 地址： | 350001 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 蜜蜂 急性 麻痹 病毒 引物 探针 应用 及其 方法 | ||
1.一种检测蜜蜂急性麻痹病毒的引物组和探针，其特征在于，包括上游引物ABPV-F、下游引物ABPV-R及TaqMan探针ABPV-P；所述上游引物ABPV-F的序列如：SEQ ID NO.1所示；所述下游引物ABPV-R的序列如：SEQ ID NO.2所示；所述TaqMan探针ABPV-P的序列如：SEQ IDNO.3所示。
2.根据权利要求1所述的引物组和探针，其特征在于，所述TaqMan探针ABPV-P的5'端采用荧光基团ROX进行修饰，3'端采用BHQ1进行修饰。
3.一种权利要求1或2所述的引物组和探针扩增得到的目的片段，其特征在于，所述扩增得到的目的片段的大小为191bp，序列如SEQ ID NO.4所示。
4.一种权利要求1或2所述的引物组和探针在制备检测蜜蜂急性麻痹病毒产品方面的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测蜜蜂急性麻痹病毒产品为试剂盒。
6.一种非疾病诊断目的检测蜜蜂急性麻痹病毒的方法，其特征在于，采用实时荧光RT-PCR进行检测。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述实时荧光RT-PCR的反应体系包括如下组分和含量：2×One Step RT-qPCR Buffer 10μL，5U/μL DNA聚合酶0.4μL，5U/μL逆转录酶0.4μL，10μmol/LABPV-F/R各0.8μL，10μmol/LABPV-P 0.6μL，RNA模板1.0μL，RNase-freeH2O 6μL。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述实时荧光RT-PCR的反应程序为：42℃5min；95℃30s；95℃5s，63℃30s，40个循环。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述63℃为单点荧光检测。
10.根据权利要求6～9任意一项所述的方法，其特征在于，所述检测结果的判定标准为：在实验有效的情况下，样品无Ct值且无扩增曲线，表示样品中不含蜜蜂急性麻痹病毒；待测样品Ct值≤35，且出现典型的扩增曲线，表示样品中含有蜜蜂急性麻痹病毒；待测样品Ct值＞35，则对该样品重复检测，重复检测结果无Ct值则该样品不含蜜蜂急性麻痹病毒；重复检测结果有Ct值则该样品中含有蜜蜂急性麻痹病毒；
所述实验有效的情况为：阴性对照无Ct值且无扩增曲线，同时阳性对照Ct值≤35，并且出现典型的扩增曲线，说明实验为有效实验。
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