[发明专利]标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法、试剂条及试剂盒

权利要求书

1.一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：标记方法包括以下步骤：

（1）制备胶体金溶液；

（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；

（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；

（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束。

2.如权利要求1的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（3）中标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体加入时间为1s。

3.如权利要求1的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（3）中的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的加入量为：

每1mL胶体金溶液加入3.6~4.2µg抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，反应时间为10min。

4.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（2）中调节pH值所用溶液为锡酸钾溶液，用锡酸钾溶液将胶体金溶液pH值调至5.5~6.0；

锡酸钾溶液制备方法为称取2g锡酸钾，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。

5.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（1）中胶体金溶液为采用柠檬酸三钠还原法制备的万分之二的纳米金。

6.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（1）中胶体金溶液的制备方法为：

氯金酸溶液：将10g氯金酸溶于超纯水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存备用；

柠檬酸三钠溶液：称取1g柠檬酸三钠，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤， 4℃保存备用；

将2mL氯金酸溶液和98mL超纯水加入三口烧瓶中，加热至沸腾，然后加入4.5mL柠檬酸三钠溶液，待烧瓶内液体由蓝紫色变为酒红色，反应20min，冷却后室温避光保存备用。

7.如权利要求1-3任一项的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：步骤（4）中封闭剂和稳定剂为BSA溶液和PEG20000溶液，先加入稳定剂PEG20000溶液，每100mL胶体金溶液加入1mLPEG20000溶液，再加入封闭剂BSA溶液，每100mL胶体金溶液加入1mLBSA溶液。

8.如权利要求7的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，其特征在于：BSA溶液制备方法为称取10gBSA，室温溶于100mL超纯水，4℃存放，现用现配；PEG20000溶液制备方法为称取10gPEG20000，室温溶于100mL超纯水，4℃存放，现用现配。

9.一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂条，其特征在于：试剂条制备方法如下：

（1）膜的包被

包膜稀释液配方：0.01MPB，pH7.4，质量百分比浓度为0.05%海藻糖，将检测线和质控线从下至上依次包被于NC膜上；

（2）胶体金垫的制备

制备出胶体金溶液，然后分别按常规方法和如权利要求1-8任一项的方法标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体；标记完成后离心，用金复溶液浓缩，均匀铺于玻璃纤维上，放烘房烘24小时成胶体金垫；

（3）样品垫的处理

样品垫处理液配方：0.1MPBS，pH7.4，质量百分比浓度为0.1%蔗糖，质量百分比浓度0.1% BSA，质量百分比浓度0.5% Tween-20，质量百分比浓度0.5% Triton X-100，质量百分比浓度0.1% NaN₃；将处理液均匀地涂布到玻璃纤维上，放烘房烘24小时，制成样品垫；

（4）试剂条的组装

将吸水纸、NC膜、胶体金垫、样品垫、PVC底板按顺序组装后裁切成试纸条。

10.一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂盒，其特征在于：试剂盒包括检测卡和样本稀释液，检测卡包括相互扣合的卡体和卡盖，卡体和卡盖之间具有权利要求9的试纸条。