[发明专利]标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法、试剂条及试剂盒

说明书

本发明涉及一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，标记方法包括以下步骤：（1）制备胶体金溶液；（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束；打破安全范围，把免疫金放在一个相对不稳定但可控条件下，可明显提升产品显色强度和灵敏度，上述“相对不稳定但可控条件”指胶体金标记pH值略低于待标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体等电点，标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量为不饱和量，以及封闭剂和稳定剂的同时加入，最终体现在产品上显色强度明显加深，灵敏度显著提高。

技术领域

本发明属于金免疫技术领域，具体涉及一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法、试剂条及试剂盒。

背景技术

金免疫技术是一种以胶体金作为标记物的免疫标记技术，胶体金是氯金酸在还原剂的作用下，形成的带负电的疏水胶溶液，该溶液由于静电作用而成为稳定的胶体状态，即为胶体金，胶体金表面带负电荷，蛋白质的正电荷基团因静电吸附力而包被到胶体金颗粒表面，此过程即为胶体金标记，也称为金免疫。

免疫金的特性主要受金颗粒、标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量、pH值影响，最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量一般为标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体完全吸附于胶体金的最大量， 最适pH值一般为接近或略高于待标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的等电点，但最适标记状态仅能够保证免疫金的稳定性，无法在免疫层析法中明显提升产品显色强度和灵敏度。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对以上不足，提供一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，通过该方法可以提升产品显色强度和灵敏度。

还提供一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂条，其检测灵敏度高、显色速度快，显色强度好。

还提供一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的试剂盒，其使用便捷、操作简单。

为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的方法，标记方法包括以下步骤：

（1）制备胶体金溶液；

（2）将制备好的胶体金溶液调节pH值至低于最适pH值1.0～1.5；

（3）一次性加入标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，加入量低于最适标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体用量的60%～70%；

（4）加入封闭剂和稳定剂，标记结束。

作为一种优化方案，步骤（3）中标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体加入时间为1s。

作为一种优化方案，步骤（3）中的标记抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体的加入量为：

每1mL胶体金溶液加入3.6~4.2µg抗间日疟原虫pLDH单克隆抗体，反应时间为10min。

作为一种优化方案，步骤（2）中调节pH值所用溶液为锡酸钾溶液，用锡酸钾溶液将胶体金溶液pH值调至5.5~6.0。

锡酸钾溶液制备方法为称取2g锡酸钾，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。

作为一种优化方案，步骤（1）中胶体金溶液为采用柠檬酸三钠还原法制备的万分之二的纳米金。

作为一种优化方案，步骤（1）中胶体金溶液的制备方法为：

氯金酸溶液：将10g氯金酸溶于超纯水中，待完全溶解后定容至1000mL，4℃避光保存备用。

柠檬酸三钠溶液：称取1g柠檬酸三钠，室温溶于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，4℃保存备用。