[发明专利]一种新型冠状病毒2019-nCoV引物探针组合、核酸检测试剂盒及其试剂盒使用方法在审

申请号：	202110243963.4	申请日：	2021-03-05
公开（公告）号：	CN112831607A	公开（公告）日：	2021-05-25
发明（设计）人：	杨孙孝;朱兆奎;赵百慧;张春雷	申请（专利权）人：	上海伯杰医疗科技有限公司
主分类号：	C12Q1/70	分类号：	C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
代理公司：	上海硕力知识产权代理事务所(普通合伙) 31251	代理人：	郭桂峰
地址：	201415 上海市奉贤区沪杭公路1588号3号楼13***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	一种新型冠状病毒 2019 ncov 引物探针组合核酸检测试剂盒及其使用方法
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【权利要求书】：

1.一种新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合物，其特征在于：所述ORF1ab基因和N基因的引物探针序列如下表所示。

2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合物，其特征在于：根据ORF1ab基因和N基因设计的内参引物探针序列为：

内参上游引物的序列为：AGATTTGGACCTGCGAGCG；

内参下游引物的序列为：GAGCGGCTGTCTCCACAAGT；

内参探针的序列为：TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。

3.一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，其特征在于：包括核酸扩增反应液、酶混合液、ORF1ab/N反应液、阳性对照和阴性对照，所述新型冠状病毒通用型反应液设有内参。

4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，其特征在于：所述核酸扩增反应液包括扩增增强的添加剂，其中扩增增强的添加剂包括4-8％的DMSO、20-80mg/ml的BSA、0.5-1M的海藻糖。

5.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，其特征在于：所述酶混合液包括UNG酶1U、DNA聚合酶2.5U、逆转录酶200U、RNA酶抑制剂40U和酶稀释液。

6.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，其特征在于：所述ORF1ab/N反应液包括新型冠状病毒ORF1ab基因上游引物、新型冠状病毒ORF1ab基因下游引物、新型冠状病毒ORF1ab基因探针(FAM)、新型冠状病毒N基因上游引物、新型冠状病毒N基因下游引物、新型冠状病毒N基因探针(VIC)、内参上游引物、内参下游引物、内参探针(ROX)和DEPC水。

7.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，其特征在于：所述阳性对照包括新型冠状病毒2019-nCoV ORF1ab基因和N基因片段的病毒样颗粒、RnaseP病毒样颗粒和TE Buffer，所述阴性对照为0.9％的氯化钠溶液。

8.一种新冠病毒核酸检测试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

S10、预处理，分别取出核酸扩增反应液、酶混合液、新冠病毒引物探针反应液、阳性对照和阴性对照，并在室温下熔化，充分振荡混匀后瞬间离心；

S20、配置反应液并放在PCR反应管中，每个PCR反应管中20μL；

S30、进行样本核酸提取；

S40、加样，向配置的反应液中分别加入待测样本、阳性对照和阴性对照核酸各5μL，盖紧管盖，瞬时离心；

S50、扩增检测，将PCR反应管放置在荧光定量PCR仪中进行扩增检测；

S60、试剂盒中的检测靶标对应的阴性对照、阳性对照以及试剂盒中的内参基因检测同时满足要求时，进行检测样本的阴阳性判断。

9.根据权利要求8所述的一种新冠病毒核酸检测试剂盒的使用方法，其特征在于：所述步骤S50中逆转录在50℃下循环1cycle 15min；

所述步骤S50中预变性在95℃下循环1cycle 15min；

所述步骤S50中变性在95℃下循环45cycle 15min；

所述步骤S50中退火/延伸/荧光检测在55℃下循环45cycle 15min。