[发明专利]一种新型冠状病毒2019-nCoV引物探针组合、核酸检测试剂盒及其试剂盒使用方法

说明书

本发明的一种新型冠状病毒2019‑nCoV引物探针组合、核酸检测试剂盒及其试剂盒使用方法，试剂盒包括核酸扩增反应液、酶混合液、ORF1ab/N反应液、阳性对照和阴性对照，所述ORF1ab/N反应液设有内参。阳性对照参与提取和RT‑PCR扩增的过程，监控提取和扩增过程。内参可用于对样本采集、保存和运输以及核酸提取过程进行监控，避免假阴性结果的误判。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体来说是一种新型冠状病毒2019-nCoV引物探针组合、核酸检测试剂盒及其试剂盒使用方法。

背景技术

严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)属于冠状病毒(Coronavirus)，是引起2019冠状病毒病疫情的病原体。冠状病毒是一类在动物与人类之间传播的人畜共患的单链RNA病毒，冠状病毒可感染哺乳动物、鸟类，引起牛和猪的消化道疾病或鸡的上呼吸道疾病。在SARS-CoV-2发现之前，自然界常见，已知可感染人类的冠状病毒共有六种，低危型的有4种，主要引起感冒症状，它们分别是人类冠状病毒229E(HCoV-229E)、人类冠状病毒OC43(HCoV-OC43)、人类冠状病毒NL63(HCoV-NL63)、人类冠状病毒HKU1(HCoV-HKU1)；高危型有2种，严重急性呼吸系统综合症冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合症冠状病毒(MERS-CoV)。目前实验室诊断方法有抗原检测与核酸检测等容易产生实验室污染，对于反应的质量难以把控。

发明内容

本发明的目的在于解决现有的一种新型冠状病毒2019-nCoV引物探针组合、核酸检测试剂盒及其试剂盒使用方法，以解决实验室产物污染和对于反应的质量难以把控的问题。

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

一种新型冠状病毒2019-nCoV的引物探针组合物，所述ORF1ab基因和N基因的引物探针序列如下表所示。

优选的，根据ORF1ab基因和N基因设计的内参引物探针序列为：

内参上游引物的序列为：AGATTTGGACCTGCGAGCG；

内参下游引物的序列为：GAGCGGCTGTCTCCACAAGT；

内参探针的序列为：TTCTGACCTGAAGGCTCTGCGCG。

本发明提供一种新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒，包括核酸扩增反应液、酶混合液、ORF1ab4/N反应液、阳性对照和阴性对照，所述新型冠状病毒通用型反应液设有内参。

优选的，所述核酸扩增反应液包括扩增增强的添加剂，其中扩增增强的添加剂包括4-8％的DMSO、20-80mg/ml的BSA、0.5-1M的海藻糖。

优选的，所述酶混合液包括UNG酶1U、DNA聚合酶2.5U、逆转录酶200U、RNA酶抑制剂40U和酶稀释液。

优选的，所述ORF1ab/N反应液包括新型冠状病毒ORF1ab基因上游引物、新型冠状病毒ORF1ab基因下游引物、新型冠状病毒ORF1ab基因探针(FAM)、新型冠状病毒N基因上游引物、新型冠状病毒N基因下游引物、新型冠状病毒N基因探针(VIC)、内参上游引物、内参下游引物、内参探针(ROX)和DEPC水。

优选的，所述阳性对照包括新型冠状病毒2019-nCoV ORF1ab基因和N基因片段的病毒样颗粒、RnaseP病毒样颗粒和TE Buffer，所述阴性对照为0.9％的氯化钠溶液。

本发明还提供一种新冠病毒核酸检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

S10、预处理，分别取出核酸扩增反应液、酶混合液、新冠病毒引物探针反应液、阳性对照和阴性对照，并在室温下熔化，充分振荡混匀后瞬间离心；