[发明专利]GII.17型诺如病毒全人源中和性单链抗体的制备及鉴定方法

说明书

本发明提供的一种GII.17型诺如病毒全人源中和性单链抗体的制备及鉴定方法，包括：S1：利用GII.17NoV目标对象恢复期外周血和合成人抗体基因的引物制备得到scFv基因，构建重组质粒pCANTAB‑5E‑scFv电转化后培养获得初级全人源噬菌体单链抗体库。S2：采用甘氨酸‑盐酸洗脱法富集淘筛并以GII.17NoV P颗粒为固相抗原，制备得特异性GII.17NoV噬菌体单链抗体库，离心制备噬菌体上清，Phage‑ELISA鉴定噬菌体上清的特异性。S3：设计原核表达引物，以步骤S2的阳性噬菌体上清的菌液为模板，扩增scFv片段，构建pGEX‑scFv重组质粒，利用大肠杆菌表达系统表达pGEX‑scFv重组质粒，再用GST‑resin亲和层析柱纯化，加入凝血酶去除融合标签蛋白GST‑tag后获得scFv纯蛋白。该方法制备出的GII.17NoV全人源单链抗体有效库容大，且重组率和多样性好。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别是涉及一种GII.17型诺如病毒全人源中和性单链抗体的制备及鉴定方法。

背景技术

诺如病毒(norovirus，NoV)是引起全球各年龄段人群急性胃肠炎(acutegastroenteritis，AGE)暴发流行及散发的主要病原体，由NoV引起的AGE占全球AGE发病总数的近五分之一。由于NoV的低感染剂量及传播途径的多样化，导致NoV能够在医院、学校、餐厅等半封闭的环境中迅速传播。在全球范围内，NoV感染每年可致约6.99亿AGE病例和22万人死亡。在中国，NoV一年可引起80万人感染AGE，年均发病率为6.0/100人年，特别是小于5岁的儿童，年均发病率约为15.6/100人年。由此可见，NoV的暴发流行及散发是我国及世界范围内的一个重要公共卫生问题。

NoV属杯状病毒科，是单股正链小RNA病毒，直径为27～38nm，基因组全长为7.4～7.7kb。基于VP1氨基酸序列的多样性，可将NoV分为GI～GX共10个基因组，49个基因型。10个基因组中GI、GII和GIV基因组可感染人类。GII.4NoV是自1996年以来暴发流行及散发最主要的基因型，占所有NoV相关胃肠炎暴发的70％-80％。然而2014年以来，中国、日本等亚洲国家均报道了由GII.P7-GII.17新变异株引起的NoV相关胃肠炎暴发。在2014-2015年间，这一变异株在NoV暴发中占76.9％，并取代GII.4/2012Sydney株，成为我国2014～2015和2015～2016NoV流行季的主要流行株。

病毒受体是公认的引发病毒感染宿主细胞的起始步骤和关键因素之一，病原体往往为了适应不同的受体表型选择性进化。研究发现，人类组织血型抗原(Histo-bloodinggroup antigen，HBGA)是NoV的病毒受体或病毒附着因子，是研究NoV易感性和致病性的重要因素。

目前，NoV缺乏成熟的细胞培养系统及小动物感染模型，其疫苗和特异性抗病毒药物研究进展仍较缓慢。在过去30年中GII.4NoV一直是全球范围内的优势流行株，因此，现阶段NoV疫苗和特异性抗体药物的开发及研制主要集中在GII.4，然而GII.4抗体免疫对与GII.17感染不存在交叉保护作用。GII.17感染造成急性胃肠炎的问题仍然没有被解决，继续危害人类健康。

因此，针对现有技术不足，提供一种GII.17型诺如病毒全人源中和性单链抗体制备及鉴定方法料以克服现有技术不足甚为必要。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种GII.17型诺如病毒全人源中和性单链抗体的制备方法，制备的GII.17 NoV全人源单链抗体的有效库容大，且重组率和多样性好，为NoV的临床防治及相关疫苗的研制奠定了基础。

本发明的目的通过以下技术措施实现：

提供一种GII.17型诺如病毒全人源中和性单链抗体的制备方法，包括下列步骤：

S1：构建初级全人源噬菌体单链抗体库。