[发明专利]一种钙粘素融合蛋白改进复合微球的制备与应用

权利要求书

1.一种改性基质，其包含上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白，并且所述基质为疏水性微球。

2.根据权利要求1所述的改性基质，其中，所述上皮细胞钙粘素为人上皮细胞钙粘素，Fc为IgG(优选IgG1)的Fc；所述神经细胞钙粘素为人神经细胞钙粘素，Fc为IgG(优选IgG1)的Fc；

优选地，所述上皮细胞钙粘素的序列由SEQ ID NO:2所示，所述神经细胞钙粘素的序列由SEQ ID NO:5所示，

更优选地，所述上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白的Fc相同或不同，优选相同，更优选为SEQ ID NO:3所示的序列，

更优选地，所述上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白优选为SEQ ID NO:1所示的序列；所述神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白优选为SEQ ID NO:4所示的序列。

3.根据权利要求1所述的改性基质，其中，所述基质为PLGA微球，优选为PLGA/壳聚糖-肝素壳核结构复合微球。

4.改性基质的制备方法，其包含通过将上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和所述神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白与基质混合来改性所述基质。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中，所述基质为疏水性微球，优选为PLGA微球，更优选为用壳聚糖和肝素修饰的PLGA复合微球。

6.一种细胞聚集体，其是由权利要求1-3中任一项所述的改性基质和细胞形成的聚集体。

7.根据权利要求6所述的细胞聚集体，其中所述细胞为间充质干细胞，iPS细胞或14天以内囊胚期的胚胎干细胞，优选为间充质干细胞，优选来源于哺乳动物，更优选来源于人、猪或鼠。

8.权利要求6-7任一项所述的细胞聚集体，其中所述细胞与改性基质的比例为3:1至10:1，优选3:1或5:1。

9.上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白或权利要求1-3中任一项所述的改性基质或权利要求6-8所述的细胞聚集体在促进细胞免疫调控功能和/或促进软骨修复中的应用，优选地，上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白固定在同一种基质上或不同的基质上，优选所述基质为疏水性微球(优选为PLGA微球，更优选为用壳聚糖和肝素修饰的PLGA复合微球)。

10.上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白或权利要求1-3中任一项所述的改性基质或权利要求6-8所述的细胞聚集体在制备用于治疗以下疾病的药物中的用途：结肠炎、关节炎及软组织等的急慢性炎症，和急慢性关节软骨缺损等。

11.权利要求9所述的应用，其中，当用于促进细胞免疫调控功能时，所述上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和所述神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白的比例为1:5至5:1，优选1:3。

12.权利要求11所述的应用，其中，所述促进免疫调控包括增强旁分泌相关因子(例如VEGF、TGF-β、IL-6、EGF、HGF、FGF-2等)的能力、增强抗炎因子(例如IL-1、IL-10和TGFβ等)基因的表达、增强对巨噬细胞的调控能力。

13.权利要求9所述的应用，其中，当用于促进软骨修复时，所述上皮细胞钙粘素-Fc融合蛋白和所述神经细胞钙粘素-Fc融合蛋白的比例为1:1至1:3，优选1:2。

14.权利要求13所述的应用，其中，所述促进软骨修复包括促进软骨细胞分化，抑制成熟软骨细胞钙化，关节缺损修复和软骨下骨修复等。