[发明专利]一种凝血酶磁珠及其制备方法在审
申请号: | 202110256703.0 | 申请日: | 2021-03-09 |
公开(公告)号: | CN112997967A | 公开(公告)日: | 2021-06-22 |
发明(设计)人: | 李昊元;史之峰;毛颖;杨志朋 | 申请(专利权)人: | 复旦大学附属华山医院 |
主分类号: | A01K67/027 | 分类号: | A01K67/027 |
代理公司: | 北京八月瓜知识产权代理有限公司 11543 | 代理人: | 李斌 |
地址: | 200040 上*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 凝血酶 及其 制备 方法 | ||
1.一种凝血酶磁珠,其特征在于,所述凝血酶磁珠为羧基化磁珠与凝血酶反应形成的带凝血酶的磁珠。
2.一种权利要求1所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1.磁珠活化:将羧基化磁珠通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与N-羟基琥珀酰亚胺试剂混合激活,后放置于2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液中,再进行混匀,得到活化后的磁珠;
S2.凝血酶与活化磁珠链接:将步骤S1中得到的活化后的磁珠用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗,随后加入凝血酶,再进行混匀;
S3.封闭磁珠未连接的羧基:将步骤S2中得到的磁珠放置于磁力架上,移液器弃去上清,同时加入2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液与血清蛋白;
S4.清洗与保存:将步骤S3中得到的磁珠放置于磁力架上,弃去上清,加入磷酸缓冲盐溶液,得到凝血酶磁珠。
3.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,在磁珠活化之前对羧基化磁珠进行清洗,羧基化磁珠清洗的方式为:取羧基化磁珠,用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗,再放在磁力架上,将羧基化磁珠聚集于试管底部,再用移液器吸弃上清。
4.根据权利要求3所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液的pH值为6.5,浓度为0.05mol/L,清洗过程中所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液与所述羧基化磁珠的体积比为5:1。
5.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述羧基化磁珠的粒径为100-120nm,浓度为5mg/ml。
6.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与所述N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:2。
7.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,步骤S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与所述羧基化磁珠的质量比为1:9.8-10.2;步骤S1中所述混匀的温度为20-25℃,时间为3-5h。
8.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,步骤S2中所述凝血酶与步骤S1中羧基化磁珠的投料比为50-100:200,所述凝血酶以ug计,所述羧基化磁珠以uL计;步骤S2中所述混匀的温度为20-25℃,时间为6-8h。
9.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,步骤S3中所述血清蛋白与步骤S2中凝血酶的质量比为1000:50-100。
10.根据权利要求2所述的凝血酶磁珠的制备方法,其特征在于,步骤S4中得到凝血酶磁珠在4±0.5℃下放置保存。
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