[发明专利]一种凝血酶磁珠及其制备方法

说明书

本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种凝血酶磁珠及其制备方法。凝血酶磁珠为羧基化磁珠与凝血酶反应形成的带凝血酶的磁珠。凝血酶磁珠的制备方法包括以下步骤:磁珠清洗、磁珠活化、凝血酶与活化磁珠链接、封闭磁珠未连接的羧基、清洗与保存。本发明中的凝血酶磁珠，无需进行开颅后颅内局部注射凝血酶、形成血栓等复杂操作，仅需远端静脉注射凝血酶磁珠，随后在需要形成血栓的局部放置磁铁，从而形成血栓，本发明能够更加方便、精确和高效地在形成体内血栓，提高了形成血栓位置的准确性，本发明的制备方法方便高效，可以很好地将凝血酶与磁珠相互结合。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其是涉及一种凝血酶磁珠及其制备方法。

背景技术

中国脑卒中发病率为世界第一，根据我国第三次国民死因调查结果表明，脑卒中已经升为中国第一位死因。缺血性脑卒中的主要原因为脑血管栓塞，而急性期最有效的治疗方案为溶栓治疗。为了了解溶栓药物对血栓的积极作用和作用机理，需要在动物脑部形成血栓，随后注入溶栓药物，观察溶栓药物的作用效果。

目前动物脑梗死模型血栓的产生方式主要有：1、将血液放置于体外，形成血栓块后，注射入体内产生血栓栓塞血管；2、将凝血酶注射到血管局部，形成血栓。但是局部注射常常引起血管渗漏，无法止血，或者凝血酶被血液冲到远端血管，无法在想要的位置形成栓塞。

发明内容

本发明的目的在于提供一种凝血酶磁珠，在体内栓塞时，无需进行开颅后颅内局部注射凝血酶、形成血栓等复杂操作，能够更加方便、精确和高效地在形成体内血栓，也能在病理实验中在想要的位置更快形成血栓，本发明还提供一种其制备方法。

本发明提供一种凝血酶磁珠，所述凝血酶磁珠为羧基化磁珠与凝血酶反应形成的带凝血酶的磁珠。

羧基化磁珠中的羧基与凝血酶中的氨基发生反应。

本发明所述凝血酶磁珠的的制备方法包括以下步骤：

S1.磁珠活化：将羧基化磁珠通过1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂(EDC)与N-羟基琥珀酰亚胺试剂(NHS)混合激活，后放置于2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)缓冲溶液中，再进行混匀，得到活化后的磁珠；

S2.凝血酶与活化磁珠链接：将步骤S1中得到的活化后的磁珠用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗，随后加入凝血酶，再进行混匀；

S3.封闭磁珠未连接的羧基：将步骤S2中得到的磁珠放置于磁力架上，移液器弃去上清，同时加入2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液与血清蛋白；

S4.清洗与保存：将步骤S3中得到的磁珠放置于磁力架上，弃去上清，加入磷酸缓冲盐溶液，得到凝血酶磁珠。

优选地，在磁珠活化之前对羧基化磁珠进行清洗，羧基化磁珠清洗的方式为：取羧基化磁珠，用2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液清洗，再放在磁力架上，将羧基化磁珠聚集于试管底部，再用移液器吸弃上清，去除杂质。

优选地，所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液的pH值为6.5，浓度为0.05mol/L，清洗过程中所述2-(N-吗啉)乙磺酸缓冲溶液与所述羧基化磁珠的体积比为5:1。

优选地，步骤S1中所述羧基化磁珠的粒径为100-120nm，浓度为5mg/ml。

优选地，步骤S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与所述N-羟基琥珀酰亚胺的摩尔比为1:2，可以高效活化羧基。

优选地，步骤S1中所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐试剂与所述羧基化磁珠的质量比为1:9.8-10.2，优选为1:10；步骤S1中所述混匀的温度为20-25℃，时间为3-5h。